硼替佐米在異基因造血干細(xì)胞移植中作用的初步研究.pdf

1、目的:探討硼替佐米在小鼠非清髓性骨髓移植預(yù)處理中的作用;復(fù)制小鼠aGVHD模型,觀察較小劑量的硼替佐米能否減輕aGVHD,并對其可能機(jī)制進(jìn)行探討。
　　 第一部分:硼替佐米在小鼠非清髓性骨髓移植預(yù)處理中作用的研究
　　 方法:雄性C57BL/6(H-2b)小鼠為供鼠,雌性BALB/c(H-2d)小鼠為受鼠,BALB/c小鼠接受直線加速器X射線全身照射(TBI),總劑量為4.0Gy。將BALB/c小鼠隨機(jī)分成5組,每組8只

2、。具體分組如下:A組:未經(jīng)任何處理組,小鼠正常飼養(yǎng);B組:TBI+CTX組,小鼠Od照射后于+2d經(jīng)腹腔注射CTX(劑量為200mg/kg);C組:TBI+硼替佐米組,小鼠于Od(照射前)、+3d經(jīng)尾靜脈注射硼替佐米(劑量為0.5mg/kg);D組:TBI+CTX+供者細(xì)胞輸注組,小鼠Od照射后經(jīng)尾靜脈注射供鼠1×107個(gè)脾細(xì)胞及3×107個(gè)骨髓細(xì)胞懸液,并于+2d經(jīng)腹腔注射CTX(劑量為200mg/kg);E組:TBI+硼替佐米+供者

3、細(xì)胞輸注組,小鼠Od照射后經(jīng)尾靜脈注射供鼠1×107個(gè)脾細(xì)胞及3×107個(gè)骨髓細(xì)胞懸液,并于Od(照射前)、+3d經(jīng)尾靜脈注射硼替佐米(劑量為0.5mg/kg)。觀察各組小鼠造血恢復(fù)、生存情況及嵌合狀態(tài)。
　　 結(jié)果:1.各組小鼠造血恢復(fù)時(shí)間分別為(16.00±1.73)d、(14.67±1.15)d、(15.00±1.73)d、(15.67±1.52)d,兩兩比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。2.B組中有一只小鼠于+6d死亡

4、,其余各組無一死亡。3.D組+7d通過流式細(xì)胞術(shù)在外周血細(xì)胞中檢測到供者來源細(xì)胞其比例為(49.07±10.23)％,+14d時(shí)最高為(77.38±3.93)％,+24d較前有所下降,但其比例仍在50％以上,為(55.66±11.60)％。E組+7d供者來源細(xì)胞比例為(27.13±6.81)％,明顯低于D組(P＜0.05),+14d時(shí)降至(0.68±0.11)％,+24d時(shí)已測不到供者來源的細(xì)胞。
　　 第二部分:硼替佐米對小鼠

5、aGVHD作用的研究
　　 方法:雄性C57BL/6(H-2b)小鼠為供鼠,雌性BALB/c(H-2d)小鼠為受鼠。BALB/c小鼠接受直線加速器X射線全身照射(TBI),總劑量為7.0Gy。將BALB/c小鼠隨機(jī)分為5組,其中A、B、C三組小鼠各17只(8只用于一般觀察,9只用于行NF-κB蛋白檢測),D、E兩組小鼠各8只。具體分組為:A組:未經(jīng)任何處理組,小鼠正常飼養(yǎng);B組:TBI組;C組:TBI+硼替佐米組,小鼠于Od(照

6、射前)、+3d經(jīng)尾靜脈注射硼替佐米(劑量為0.5mg/kg);D組:TBI+供者細(xì)胞輸注組,小鼠Od照射后經(jīng)尾靜脈注射供鼠1x107個(gè)脾細(xì)胞及5×106個(gè)骨髓細(xì)胞懸液;E組:TBI+硼替佐米+供者細(xì)胞輸注組,小鼠Od照射后經(jīng)尾靜脈注射供鼠1×107個(gè)脾細(xì)胞及5×106個(gè)骨髓細(xì)胞懸液,并于Od(照射前)、+3d經(jīng)尾靜脈注射硼替佐米(劑量為0.5mg/kg)。觀察各組小鼠造血恢復(fù)、aGVHD的發(fā)生及病理學(xué)改變、生存時(shí)間、存活率及嵌合狀態(tài)。觀

7、察未移植組小鼠肝及小腸的病理學(xué)改變,Western blot法測定未移植組小鼠肝臟及小腸組織中NF-κB的表達(dá)。
　　 結(jié)果:1.B、C組中8只小鼠均在10d內(nèi)全部死于骨髓衰竭。D、E兩組小鼠造血功能開始恢復(fù)(WBC＞1×109/L)的時(shí)間分別為(9.7±0.6)d、(10.3±0.6)d,兩者比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。臨床aGVHD評(píng)分:E組為(5.85±0.40)分,D組為(7.37±0.32)分,E組明顯低于D組(

8、P＜0.05)。D組受鼠小腸、肝及皮膚的病理學(xué)分析均屬于Ⅲ～Ⅳ度aGVHD。E組aGVHD開始出現(xiàn)時(shí)間較D組延遲,病理學(xué)檢查提示有Ⅰ～Ⅲ度aGVHD改變。D組平均生存時(shí)間為(11.38±2.45)d,E組平均生存時(shí)間為(21.25±5.70)d,明顯長于D組(P＜0.05)。+12d時(shí)受鼠外周血中供者來源細(xì)胞的比例均＞90％。2.+5d時(shí)A組肝及小腸組織未出現(xiàn)病理學(xué)改變,B組出現(xiàn)了較明顯的病理學(xué)改變,而C組較B組輕。B組于+1d、+3d

9、、+5d肝及小腸組織總蛋白及細(xì)胞核蛋白中NF-κB p65表達(dá)均高于A組(P＜0.05),且隨時(shí)間延長呈增高趨勢。C組于照射后+3d、+5d肝及小腸組織總蛋白及細(xì)胞核內(nèi)NF-κB p65表達(dá)均高于A組(P＜0.05),亦隨時(shí)間延長呈增高趨勢。C組于照射后+1d、+3d、+5d肝及小腸組織總蛋白及細(xì)胞核蛋白中NF-kBp65表達(dá)均明顯低于B組(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:(1)初步證實(shí)了小鼠非清髓性骨髓移植預(yù)處理中Od、+3d加