HLA單倍體分型和抗HLA抗體在異基因造血干細胞移植中的作用.pdf

1、第一部分：在家系完整的單倍體聯(lián)合第三方臍血移植中研究供受者HLA單倍型和等位基因錯配對移植預后的影響
　　目的：在 HLA-A,-B,-C,-DRB1,-DQB1高分辨基因分型的基礎上，分析供受者單倍型和等位基因錯配對單倍體聯(lián)合第三方臍血移植預后的影響。
　　方法：回顧性分析2012年1月至2014年12月期間行單倍體聯(lián)合第三方臍血移植的230例惡性血液病患者，采用基因測序和寡核苷酸探針雜交方法進行供受者HLA-A,B,C，

2、DRB1,DQB1高分辨基因分型。
　　結果：供受者根據(jù) HLA-A,-B,-C,-DRB1,-DQB1基因分型結果及相合度，分為HLA-5/10、-6/10、-7/10、≥8/10四組，其3年OS分別為48.7％、59.3%、71.1%、38.3%（P=0.068）。供受者 HLA-6/10相合與 HLA-5/10相比，3年 OS有統(tǒng)計學差異（P=0.041）。在供受者HLA-6/10相合組：當HLA-I類位點相合3年OS為61

3、.5%，與HLA-5/10相比有明顯統(tǒng)計學差異（P=0.017），且HLA-A位點等位基因相合3年OS及EFS分別為90.5%和84.4%，與HLA-5/10相比，均有統(tǒng)計學差異（P=0.013，P=0.013）。供受者與臍血單倍型相合為88例，不合為51例，兩者巨核系重建累積發(fā)生率為95.3%和86.2%，有明顯統(tǒng)計學差異（P=0.007），粒系重建累積發(fā)生率為98.8%和96.1%（P=0.022）。
　　結論：在單倍體聯(lián)合第

4、三方臍血移植的供體選擇中，HLA相合度及等位基因錯配對預后均有意義，選擇與供受者單倍型相合的第三方臍血可促進移植后造血重建。
　　第二部分：不同MFI強度的DSA對內皮細胞損傷機制的實驗研究
　　目的：建立體外抗供者HLA特異性抗體（donor specific antibody,DSA）模型，在前期研究的基礎上，分析不同平均免疫熒光強度（mean fluorescence intensity,MFI）的 DSA對人臍靜脈內

5、皮細胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)上PI3K/AKT增殖通路的影響，闡明不同MFI強度的DSA引起內皮細胞增殖是內皮細胞受損的重要因素，從而對DSA影響異基因造血干細胞移植的預后提供實驗依據(jù)。
　　方法：實驗采取兩株人臍靜脈內皮細胞，通過Luminex方法檢測不同濃度DSA的 MFI值，設立陰性組、陽性組、中等陽性組、強陽性組、強強陽性組為實驗組，以IgG為對照組，采

6、用Western Blot及CFSE實驗方法，研究不同MFI值的DSA對內皮細胞增殖的影響。
　　結果：抗HLA-A2人源性抗體在濃度為0.00375 ug/ml、0.015 ug/ml、0.03 ug/ml、0.06 ug/ml、0.25 ug/ml時MFI值處于陰性、陽性、中等陽性、強陽性、強強陽性；抗HLA-Cw1抗體在濃度為0.09 ug/ml、0.18 ug/ml、0.375 ug/ml、0.75 ug/ml、1.5 u

7、g/ml時MFI值處于陰性、陽性、中等陽性、強陽性、強強陽性。以IgG為對照組，不同MFI值的抗HLA-A2抗體與HUVEC-1共培養(yǎng)15min后，PI3K/AKT信號通路中蛋白S6RP磷酸化的表達分別為78.2%、83.6%、90.6%、93.0%、100%、94.3%?？笻LA-Cw1抗體與HUVEC共培養(yǎng)后S6RP磷酸化的表達分別為67.4%、75.9%、89.3%、89.7%、93.6%、100%。不同MFI值的抗HLA-A2抗

8、體和抗HLA-Cw1抗體與CFSE標記的內皮細胞共培養(yǎng)48小時后，流式細胞儀檢測細胞內熒光強度變化，在DSA陰性組、陽性組、中等陽性組、強陽性組、強強陽性組中，細胞增殖率分別為38.9%、58.4%、29.6%、60.1%、66.9%和20%、10%、15%、35%、90%。
　　結論：本實驗在前期研究的基礎上，證實了不同 MFI強度的抗 HLA-A2、HLA-Cw1抗體，均可引起PI3K/AKT信號通路上蛋白S6RP磷酸化表達增