異基因造血干細(xì)胞移植后巨細(xì)胞病毒感染的研究.pdf

1、研究目的:第一部分:巨細(xì)胞病毒(Cytomegalovirus，CMV)是造血干細(xì)胞移植后最常見機(jī)會(huì)性感染源之一，在造血干細(xì)胞移植早期CMV疾病的死亡率達(dá)80％以上，早期預(yù)防和診斷是減少CMV疾病發(fā)生的關(guān)鍵。CMV感染和致病受到病毒本身基因、宿主基因和機(jī)體免疫因素的影響。本研究目的是探討異基因造血干細(xì)胞移植(Allogeneic hematopoieticstem cell transplantation，Allo-HSCT)術(shù)后受者C

2、MV-DNA陽(yáng)性率（本文稱CMV感染率），CMV-DNA首次檢出陽(yáng)性的中位時(shí)間，CMV-DNA陽(yáng)性病例的分布及疑是CMV病的病死率，并分析CMV感染相關(guān)危險(xiǎn)因素，為合理選擇供體，制定合適的移植預(yù)處理方案和病毒防治方案提供參考價(jià)值。
　　第二部分:本部分研究通過(guò)對(duì)移植后受者T細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞重建，初步探索Allo-HSCT后受者的免疫重建狀態(tài)對(duì)CMV激活的影響。
　　研究方法:第一部分:回顧性分析2004年1月至2014年3

3、月在東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院血液科108例行Allo-HSCT患者臨床資料及術(shù)后CMV感染情況。隨訪日期截止至2014年4月31日，隨訪中位時(shí)間1492(51～3484)d。詳細(xì)記錄納入病例的性別、年齡、原發(fā)疾病名稱及診斷時(shí)間、危險(xiǎn)度分層（標(biāo)危、高危）、ABO血型配型和人類白細(xì)胞抗原(Human leucocyte antigen，HLA)配型相合情況、供者與受者關(guān)系、預(yù)處理方案、移植時(shí)間、抗人胸腺細(xì)胞免疫球蛋白(Anti-human th

4、ymus globulin，ATG)使用情況、造血重建時(shí)間、急性移植物抗宿主病(acute Graft-versus-host disease，aGVHD)及慢性移植物抗宿主病(chronic Graft-versus-host disease，cGVHD)分度及預(yù)后等情況，在隨訪期內(nèi)采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)法(Fluorescent quantitation Polymerase ChainReaction，F(xiàn)Q-PCR)定期檢測(cè)Al

5、lo-HSCT術(shù)后受者尿CMV-DNA，記錄尿中首次檢出CMV-DNA陽(yáng)性的時(shí)間、CMV-DNA陽(yáng)性分布及預(yù)后等情況。
　　第二部分:選擇2010年1月～2014年3月行Allo-HSCT受者54例，利用FQ-PCR定期檢測(cè)移植后90d內(nèi)受者尿液中CMV-DNA，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果將54例分為CMV-DNA陽(yáng)性組（簡(jiǎn)稱CMV陽(yáng)性組）和CMV-DNA陰性組（簡(jiǎn)稱CMV陰性組），同時(shí)選取30例尿CMV-DNA陰性的健康供者作為本部分的實(shí)驗(yàn)參

6、考，采用流式細(xì)胞儀(Flow cytometry，F(xiàn)CM)檢測(cè)技術(shù)連續(xù)檢測(cè)54例Allo-HSCT術(shù)后30d，60d和90d受者和30例健康供者外周血CD3+，CD3℃D4+，CD3+CD8+以及CD3-CD16+CD56+（即NK細(xì)胞）重建情況，比較CMV陽(yáng)性組與陰性組免疫狀態(tài)的差異。
　　結(jié)果:第一部分:按納入標(biāo)準(zhǔn)入選的108例接受Allo-HSCT的受者，尿CMV-DNA陽(yáng)性率為52.78％(57/108)，首次尿中檢出CM

7、V-DNA陽(yáng)性的中位時(shí)間為44(3～308)d，主要集中在移植后30～100d。截止隨訪期，發(fā)展疑是為CMV病17例，分別分布在肺、腸、膀胱、肝臟以及口腔等部位;移植后疑是因CMV病而死亡的病例為10例，占CMV-DNA陽(yáng)性病例數(shù)的17.54％(10/57)，其中疑是CMV間質(zhì)性肺炎(CMV-Interstitialpneumonia，CMV-IP)病死率最高，占死亡病例的35.29％(6/17)。單因素分析顯示CMV-DNA陽(yáng)性率與供

8、、受者HLA配型、預(yù)處理方案中是否使用ATG、移植后粒細(xì)胞缺乏（簡(jiǎn)稱粒缺）時(shí)間＞10d及GVHD等因素有關(guān);與受者年齡，性別，原發(fā)疾病種類，原發(fā)疾病到移植間隔時(shí)間，原發(fā)疾病分級(jí)，干細(xì)胞來(lái)源，供者性別，供、受者ABO血型是否相同及移植季節(jié)均無(wú)關(guān)。多因素分析顯示粒缺時(shí)間＞10d和GVHD是CMV-DNA陽(yáng)性率增高的高危因素。
　　第二部分:納入研究的54例患者均獲得造血重建，粒系造血重建(＞0.5×109/L)的中位時(shí)間為12(9～2

9、0)d，血小板造血重建(＞20×109)中位時(shí)間為22(12～46)d。32例患者在移植90d內(nèi)出現(xiàn)CMV-DNA陽(yáng)性，CNMV-DNA陽(yáng)性檢出的中位時(shí)間為43(3～76)d;移植后30d CMV-DNA陽(yáng)性組CD3+T細(xì)胞比例低于CMV-DNA陰性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，60d，90d兩組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。移植后30d CMV-DNA陽(yáng)性組CD3+CD4+T細(xì)胞比例低于CMV-DNA陰性組，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，移植后60d，90d兩組

10、差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在移植后90d內(nèi)兩組CD3+CD8+T細(xì)胞比例均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。移植后60dCMV-DNA陽(yáng)性組CD3-CD16+CD56+NK細(xì)胞比例高于CMV-DNA陰性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:第一部分:CMV是Allo-HSCT術(shù)后常見的感染病毒之一，預(yù)處理方案中加用ATG，移植后將粒缺時(shí)間控制在10d以內(nèi)以及預(yù)防GVHD的發(fā)生均可以降低CMV-DNA陽(yáng)性率。雖然本組研究發(fā)現(xiàn)CMV-DNA陽(yáng)性率與干細(xì)胞來(lái)源無(wú)關(guān)，但