Notch1基因表達(dá)對T-ALL細(xì)胞增殖及硼替佐米敏感性的影響.pdf

1、目的：
　　通過檢測干擾Notch1基因后SupT1細(xì)胞的增殖、凋亡和Notch1受體基因及其下游靶基因表達(dá)水平的變化，探討Notch信號通路與急性T淋巴細(xì)胞白血病發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。在下調(diào)Notch1基因后的SupT1細(xì)胞中加入1ng/μl硼替佐米，檢測對SupT1細(xì)胞增殖、凋亡和Notch1受體基因及其下游靶基因表達(dá)水平的變化，探討Notch1基因表達(dá)對硼替佐米敏感性的影響。
　　方法：
　　1．利用攜帶Notch1

2、特異性和非特異性shRNA的慢病毒載體包裝成病毒顆粒感染SupT1細(xì)胞，選取干擾效率高的感染細(xì)胞作為干擾組，分別于48、72、96個(gè)小時(shí)后，采用CCK-8法檢測各組細(xì)胞增殖率；采用流式細(xì)胞術(shù)檢測各組細(xì)胞凋亡率(AnnexinV+／7-AAD-和 AnnexinV+／7-AAD+)；采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測Notch1受體基因及下游靶基因基因Hes1、NF-κB、c-myc的mRNA表達(dá)水平。
　　2．在感染SupT1細(xì)胞后，分

3、別在第24、48、72小時(shí)三個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)加入1ng/μl硼替佐米繼續(xù)孵育24小時(shí)后，采用CCK-8法、流式細(xì)胞術(shù)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測其在干擾Notch1基因后第48、72、96小時(shí)二者共同作用對SupT1細(xì)胞增殖、凋亡及Notch1受體基因及下游靶基因基因Hes1、NF-κB、c-myc的mRNA表達(dá)水平的影響。
　　結(jié)果：
　　1．Notch1干擾組細(xì)胞的增殖較空白對照組、空載體組明顯降低，細(xì)胞抑制率較空白對照組、空

4、載體組明顯升高(P均<0.05），且細(xì)胞增殖的抑制作用呈時(shí)間依賴性。
　　2．干擾組AnnexinV-PE+／7-AAD-較空白對照組、空載體組明顯升高(P均<0.05)；而各組細(xì)胞Annexin V-PE+／7-AAD+無明顯變化(P>0.05)。
　　3．干擾組細(xì)胞中Notch1受體基因及其下游靶基因Hes1、c-myc、NF-κB表達(dá)較空白對照組及空載體組顯著降低(P均<0.05)。
　　4．硼替佐米對SupT1

5、細(xì)胞的增殖有明顯的抑制作用，且抑制作用呈濃度和時(shí)間依賴性；干擾加藥組、空載加藥組細(xì)胞抑制率均高于干擾組、空載體組(P均<0.05)。
　　5．干擾加藥組細(xì)胞AnnexinV-PE+／7-AAD-較空白對照組及空載體組明顯升高(P均<0.05)；各組細(xì)胞AnnexinV-PE+／7-AAD+細(xì)胞差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　6．干擾加藥組下游基因表達(dá)水平較干擾組明顯降低(P<0.05)，且干擾組及干擾加藥組的基因N

6、otch1、Hes1、c-myc、NF-κB表達(dá)抑制呈時(shí)間依賴性。
　　結(jié)論：
　　1．特異性Notch1-shRNA-4252可有效下調(diào)Notch1 mRNA的表達(dá)，并降低下游靶基因水平的表達(dá)；
　　2．Notchl表達(dá)下調(diào)可以抑制SupT1細(xì)胞增殖，且細(xì)胞抑制作用呈時(shí)間依賴性；促進(jìn)SupT1細(xì)胞的早期凋亡。
　　3．shRNA干擾后硼替佐米對SupT1細(xì)胞增殖抑制、凋亡、Notch1受體基因及下游靶基因抑制更