氫化可的松誘導(dǎo)NK-92MI細(xì)胞株凋亡機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、人們觀察應(yīng)激對機(jī)體免疫功能影響時發(fā)現(xiàn)，應(yīng)激會導(dǎo)致免疫功能低下，其中，自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)殺傷活性也受到抑制。研究表明，慢性應(yīng)激可顯著降低鼠脾NK細(xì)胞的殺傷活性并減少脾NK細(xì)胞的數(shù)量，而外科手術(shù)應(yīng)激可下調(diào)癌癥病人NK細(xì)胞數(shù)量和活性。NK細(xì)胞是天然免疫的主要細(xì)胞，NK細(xì)胞殺傷活性及免疫調(diào)節(jié)功能的紊亂可能導(dǎo)致自身免疫疾病和惡性腫瘤的發(fā)生。 應(yīng)激導(dǎo)致免疫功能改變的主要介導(dǎo)通路為下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸（HPA軸)和交感神經(jīng)系統(tǒng)(S

2、NS)。HPA軸激活后從腎上腺皮質(zhì)釋放的糖皮質(zhì)激素(GC)是免疫抑制作用的重要調(diào)節(jié)遞質(zhì)。人體皮質(zhì)激素的分泌具有晝夜節(jié)律性，生理濃度約為3.9～16.3μg/d1，應(yīng)激情況下，人體內(nèi)可的松水平可高達(dá)30～80μg/d1并伴有免疫抑制，提示，應(yīng)激時出現(xiàn)的免疫抑制與體內(nèi)糖皮質(zhì)激素水平有關(guān)。 GC可致數(shù)種正常組織細(xì)胞和腫瘤淋巴樣細(xì)胞死亡。但GC是否能誘導(dǎo)人NK細(xì)胞凋亡尚無定論。本實(shí)驗(yàn)研究了氫化可的松(hydrocortisone，HC)

3、體外對NK-92MI細(xì)胞株殺傷活性及凋亡的影響，為深入研究應(yīng)激與免疫抑制之間的關(guān)系奠定基礎(chǔ)。 方法： 用不同濃度的氫化可的松處理NK-92MI細(xì)胞；采用MTT比色法測定NK-92MI細(xì)胞的增殖率和對靶細(xì)胞的殺傷作用；流式細(xì)胞術(shù)檢測NK-92MI細(xì)胞凋亡率；RT-PCR，檢測凋亡相關(guān)基因Bc1-2、Bax的表達(dá)。 結(jié)果： 作用NK-92MI細(xì)胞24、48、72小時后，7.5μg/d1和15μg/d1的HC對

4、其增殖無明顯抑制作用(P>0.05)，30μg/d1、60μg/d1、120μg/d1、240μg/d1的HC對其增殖均有明顯抑制作用(P<0.05)，且呈濃度時間依賴性；效靶比為5：1時，7.5μg/d1和15μg/d1的HC對NK-92MI細(xì)胞殺傷活性無顯著影響(P>0.05)，301μg/d1、60μg/d1、120μg/d1、240μg/d1的HC對其殺傷活性抑制作用顯著(P<0.05)，呈濃度依賴性；60μg/d1、240μg

5、/d1的HC可誘導(dǎo)NK-92MI細(xì)胞發(fā)生凋亡；與對照組相比，60μg/d1HC24h組Bcl-2基因表達(dá)降低(P<0.05)，Bax基因表達(dá)增高(P<0.01)。 討論 NK-92細(xì)胞作為一種自然殺傷細(xì)胞系，具有與人外周血NK細(xì)胞相似的表面分子特征和功能特點(diǎn)，NK-92MI細(xì)胞是NK-92細(xì)胞轉(zhuǎn)染IL-2cDNA后非IL-2依賴型細(xì)胞株。本實(shí)驗(yàn)證明，應(yīng)激濃度的HC體外可以抑制NK-92MI細(xì)胞增殖、降低其殺傷活性并誘導(dǎo)其

6、凋亡。這一結(jié)果為神經(jīng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)與免疫系統(tǒng)之間密切的功能聯(lián)系提供了依據(jù)，提示：應(yīng)激時HPA軸激活后，刺激腎上腺皮質(zhì)大量釋放的糖皮質(zhì)激素抑制了NK細(xì)胞的增殖和殺傷活性并誘導(dǎo)其凋亡，這很可能就是應(yīng)激時NK細(xì)胞功能抑制及循環(huán)數(shù)量減少的原因之一。然而，體內(nèi)糖皮質(zhì)激素濃度是處于動態(tài)變化之中，且應(yīng)激時各種內(nèi)環(huán)境因素相互影響，體外實(shí)驗(yàn)不可能完全反映體內(nèi)應(yīng)激狀態(tài)，因此，仍需結(jié)合體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步確定應(yīng)激時免疫功能尤其是NK細(xì)胞功能抑制的具體原因。凋亡是多基

7、因嚴(yán)格控制的過程。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)HC處理組促凋亡的Bax基因的轉(zhuǎn)錄水平高于對照組，Bcl-2基因轉(zhuǎn)錄水平下降，證實(shí)HC誘導(dǎo)的NK-92MI細(xì)胞凋亡與Bax/Bcl-2升高有關(guān)。 結(jié)論： 1、應(yīng)激濃度(30μg/d1、60μg/d1、120μp/d1、240μg/d1)的HC可以抑制NK-92MI細(xì)胞生長和增殖且呈濃度時間依賴性； 2、應(yīng)激濃度的HC降低NK-92MI細(xì)胞殺傷活性，呈濃度依賴性； 3、60μg/d