胃康舒寧誘導(dǎo)胃癌SGC-7901細(xì)胞株凋亡機(jī)制的研究.pdf

1、　　研究背景
　　胃癌( Gastric Cancer)是東亞國(guó)家,包括中國(guó)、日本和韓國(guó)在內(nèi)的常見腫瘤,全球胃癌死亡者每年超過 70萬。我國(guó)是胃癌的高發(fā)地區(qū),據(jù) 2005 年我國(guó)公布的數(shù)據(jù)顯示[1],我國(guó)胃癌發(fā)病率在男性中達(dá) 37.1/10 萬,女性中為 17.4/10萬,死亡率分別為 15/10 萬和 13.3/10 萬。由此可見胃癌是嚴(yán)重危害人類健康的常見腫瘤之一。而臨床大多數(shù)胃癌患者的死因是術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移,所以尋找手術(shù)以

2、外的治療胃癌的藥物和方法是目前抗腫瘤研究的一個(gè)重要課題。中醫(yī)藥療法是胃癌綜合治療的重要手段之一,中藥對(duì)于減輕放化療不良反應(yīng)、降低手術(shù)后復(fù)發(fā)率、改善患者的生活質(zhì)量、延長(zhǎng)患者生存期、均有著重要的意義。
　　胃康舒寧方是本課題組在大量臨床臨床腫瘤治療經(jīng)驗(yàn)中,立足于解毒化濁、補(bǔ)氣養(yǎng)陰為治則,將多法合于一方,總結(jié)出來的。該方是針對(duì)胃癌和胃癌前病變臨床癥狀治療,以及手術(shù)后放化療期間癥狀改善的有效方劑。能在很大程度上改善胃癌患者的生存質(zhì)量,

3、延長(zhǎng)患者的生存期。胃康舒寧雖然臨床治療胃癌效果明顯,但其作用機(jī)理仍不明確,還有待進(jìn)一步研究。
　　目的：
　　通過觀察中藥復(fù)方胃康舒寧誘導(dǎo)體外人胃腺癌細(xì)胞 SGC-7901 凋亡的情況,并探討其作用機(jī)制,為治療胃癌中藥復(fù)方的研究提供思路。
　　方法：
　　用MTT法檢測(cè)胃康舒寧對(duì)胃癌細(xì)胞株SGC-7901生長(zhǎng)抑制作用；觀察胃癌細(xì)胞的光鏡結(jié)構(gòu)和電鏡結(jié)構(gòu)的變化；采用流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)胃康舒寧對(duì)胃癌細(xì)胞

4、株細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的影響,并計(jì)算出凋亡率；應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)胃康舒寧對(duì) SGC-7901 細(xì)胞株中 Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2、Bid等相關(guān)蛋白的影響。
　　結(jié)果：
　　1. MTT法顯示胃康舒寧作用人胃腺癌SGC-7901細(xì)胞株24h、48h、72h、96h后,與空白對(duì)照組相比,均能使細(xì)胞株OD值降低,抑制率隨時(shí)間增長(zhǎng)和濃度增高而增高。
　　2. 光鏡下能直接觀察到

5、胃康舒寧作用胃癌細(xì)胞株72h后部分細(xì)胞變小、變圓,細(xì)胞核變小,包膜完整但出現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象,細(xì)胞貼壁受到影響。
　　3. 電鏡下顯示胃康舒寧能造成細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)聚成團(tuán)塊,核膜完整,細(xì)胞內(nèi)線粒體變小、數(shù)目減少,胞漿內(nèi)空泡增加,滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張,細(xì)胞膜完整有突起。
　　4. 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期結(jié)果顯示：胃康舒寧作用于SGC-7901細(xì)胞48h、72h后與空白對(duì)照組比較均能使G1/G0期細(xì)胞顯著增多(P<0.05),使S、G2

6、/M期細(xì)胞較空白對(duì)照組顯著減少(P<0.05),G1/G0期細(xì)胞數(shù)量與作用時(shí)間增長(zhǎng)和濃度升高而增加。
　　5. 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡結(jié)果顯示：胃康舒寧作用于SGC-7901細(xì)胞株48h、72h均能明顯誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡(P<0.05),其作用為0.8mg/mL濃度組的作用效果最佳,其次為0.4mg/mL濃度組和0.2mg/mL濃度組。
　　6. 免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)結(jié)果顯示：與空白對(duì)照組比較胃康舒寧能顯著增強(qiáng)

7、胃癌細(xì)胞株SGC-7901內(nèi)Bax、Caspase-3、Caspae-9、Bid蛋白的表達(dá)(P<0.05),而Bcl-2蛋白的表達(dá)顯著減弱(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1. 胃康舒寧能抑制人胃癌細(xì)胞 SGC-7901 細(xì)胞的體外增殖,其抑制作用呈劑量-時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系,并能顯著影響人胃腺癌細(xì)胞 SGC-7901 細(xì)胞的顯微結(jié)構(gòu)和超微結(jié)構(gòu)。
　　2. 胃康舒寧對(duì) SGC-7901細(xì)胞周期各時(shí)相均有影響,且