野生甲殼動物白斑綜合征病毒多態(tài)位點分析及螯蝦酚氧化酶對該病毒的免疫應(yīng)答.pdf

1、甲殼類動物在水產(chǎn)養(yǎng)殖中占據(jù)重要地位，但是流行性疾病的暴發(fā)導(dǎo)致其產(chǎn)量明顯下降，尤其是細菌、真菌、病毒等的感染。為完善水產(chǎn)養(yǎng)殖病害的防御監(jiān)測機制，從根源上探究白斑綜合征病毒的特點，為水產(chǎn)養(yǎng)殖中該病毒的傳播和防治提供理論參考。本文以甲殼類動物為實驗對象，巢式PCR、電泳、克隆、轉(zhuǎn)化等相關(guān)分子生物學(xué)技術(shù)與Primer5.0、DNA star、SPSS等相關(guān)軟件聯(lián)合使用，從以下三個方面探究白斑綜合征病毒（WSSV）的相關(guān)免疫學(xué)特征：
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2、1）野生甲殼類動物攜帶白斑綜合征病毒（white spot syndrome virus, WSSV）的檢測。
　　利用巢式PCR技術(shù)檢測煙臺海域不同年份野生甲殼類動物攜帶WSSV的情況，其中6個品種包括：豆形拳蟹（Philyra pisum），圓球股窗蟹（Scopimera globosa），平背蜞（Gaetice depressus），寄居蟹（Pagurus japonicus），日本鼓蝦（Alpheus japonicas）

3、和鮮明鼓蝦（Alpheus distinguendus）是首次作為該病毒的天然宿主報道。結(jié)果還顯示病毒的攜帶量和攜帶率在不同的年份中表現(xiàn)并不相同。因此，監(jiān)測天然甲殼動物中WSSV的攜帶情況有助于我們預(yù)防該病毒的傳播和可能產(chǎn)生的爆發(fā)風(fēng)險。
　?。?）白斑綜合征病毒（WSSV）多態(tài)位點基因結(jié)構(gòu)的分析。
　　本實驗選用的樣品采集于2015年山東省煙臺市周邊的海域，包括野生甲殼類動物鮮明鼓蝦（15AD）和日本蟳（15CJ），對其攜帶

4、的WSSV進行多肽位點分析。結(jié)果顯示：Ⅰ.根據(jù)可變區(qū)ORF23/24或ORF14/15的序列比對，都能得出15AD和15CJ毒株來源于WSSV-TW；Ⅱ.可變區(qū)ORF94和ORF125可作為探究該病毒流行病學(xué)的依據(jù)；Ⅲ.同源區(qū)hr9和轉(zhuǎn)座酶對病毒來源的分析結(jié)果不一致，可見這兩個多態(tài)位點可能一般不用來探究病毒的起源。Ⅳ.通過與養(yǎng)殖甲殼類動物攜帶的WSSV對比，未發(fā)現(xiàn)更接近原始狀態(tài)的毒株。
　?。?）注射白斑綜合征病毒對克氏原螯蝦酚氧

5、化酶活力的影響。
　　以克氏原螯蝦（Procambarus clarkii）為實驗材料，選用WSSV為研究對象，以致病菌嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila, Ah）和非致病菌大腸桿菌（DH5α）為參照物，對螯蝦（P. clarkii）進行免疫注射。在0 h~72 h之間定時檢測螯蝦血細胞和肝胰臟中酚氧化酶（Phenoloxidase, PO）活力變化。結(jié)果顯示：Ⅰ.0.1 mg/mL和1 mg/mL胰蛋白酶處理