亞高溫盆腔區(qū)域熱療聯(lián)合HSP70-PC治療浸潤性膀胱腫瘤的實驗研究.pdf

1、為探討亞高溫盆腔區(qū)域熱療治療浸潤性膀胱腫瘤的機理，以及熱休克蛋白70-肽復合物(HSP70-PC)治療浸潤性膀胱腫瘤的機理，進一步探索該兩種方法聯(lián)合治療的效果和機理，本研究進行了六部分實驗： 第一部分 亞高溫盆腔區(qū)域熱療誘導原位大鼠浸潤性膀胱腫瘤HSP70表達的研究 目的:研究不同熱療方案的亞高溫盆腔區(qū)域熱療誘導原位大鼠浸潤性膀胱腫瘤發(fā)生熱休克反應后HSP70的表達規(guī)律。 方法:經(jīng)尿道膀胱灌注MNU制備原

2、位大鼠浸潤性膀胱腫瘤動物模型。分為腫瘤對照組(A組)、單次熱療組(B組)、間隔24小時再次熱療組(C組)、間隔72小時再次熱療組(D組)。用內(nèi)生場熱療系統(tǒng)從體外加熱大鼠盆腔至41℃，持續(xù)1小時。用膠體金免疫電鏡技術檢測HSP70在腫瘤細胞中表達的部位，免疫組織化學法檢測腫瘤細胞HSP70陽性細胞表達率，并用表面加強激光解析電離飛行時間質譜技術檢測腫瘤組織勻漿上清液中HSP70表達量(HSP70Intensity和HSP70MZArea)

3、的變化。 結論:不同方案的亞高溫盆腔區(qū)域熱療均能誘導原位大鼠浸潤性膀胱腫瘤發(fā)生熱休克反應，上調HSP70表達。亞高溫盆腔區(qū)域熱療是一種溫和的加熱方法，它不能使全部腫瘤細胞發(fā)生熱休克反應。HSP70表達率不與熱療次數(shù)成正相關，但表達量與熱療次數(shù)成正相關。間隔24小時再次熱療組的HSP70表達量最高。 第二部分 大鼠膀胱腫瘤HSP70-PC的純化研究 目的:分離純化經(jīng)亞高溫盆腔區(qū)域熱療處理后大鼠膀胱腫瘤組織中

4、的熱休克蛋白70-肽復合物(HSP70-PC)。 方法:經(jīng)尿道膀胱灌注MNU制備原位大鼠浸潤性膀胱腫瘤，用內(nèi)生場熱療系統(tǒng)加熱大鼠盆腔，用改良的液相色譜三步法從大鼠膀胱腫瘤組織中分離純化HSP70-PC，用SDS-PAGE、Westernblotting、表面加強激光解析電離飛行時間質譜技術(SELDI-TOF-MS)鑒定純化的HSP70-PC及與其結合的多肽。 結論:應用我們改良的液相色譜三步法可以純化獲得高純度的HSP

5、70-PC。 第三部分 同種腫瘤來源的HSP70-PC對原位大鼠浸潤性膀胱腫瘤的治療研究 目的:研究用來自亞高溫盆腔區(qū)域熱療后原位大鼠浸潤性膀胱腫瘤的熱休克蛋白70-肽復合物(HSP70-PC)對原位大鼠浸潤性膀胱腫瘤的治療機制。 方法:將HSP70-PC用于治療相同品系的腫瘤鼠，觀察療效。經(jīng)尿道膀胱灌注MNU制備原位大鼠浸潤性膀胱腫瘤動物模型。將動物隨機分為A(腫瘤對照)組、B(HSP70-PC治療)組

6、、C(腫瘤細胞裂解液治療)組，每組5只。皮下注射治療一月后對膀胱腫瘤、膀胱引流區(qū)域髂動脈及腹主動脈旁淋巴結、脾臟進行病理研究，ELISA檢測血清RatIFN-γ含量。 結論:皮下注射HSP70-PC可以上調原位浸潤性膀胱腫瘤大鼠的細胞免疫狀態(tài)，促進腫瘤細胞凋亡，但對腫瘤細胞增殖無影響。 第四部分 亞高溫盆腔區(qū)域熱療對原位大鼠浸潤性膀胱腫瘤形態(tài)學影響的研究 目的:對不同方案和療程的亞高溫盆腔區(qū)域熱療后浸潤性

7、膀胱腫瘤形態(tài)學改變進行病理研究。 方法:制備原位大鼠浸潤性膀胱腫瘤動物模型，分為短期組和長期組。用內(nèi)生場熱療系統(tǒng)從體外加熱大鼠盆腔至41℃，不同組別熱療次數(shù)及療程不同。短期組中分為腫瘤對照組(A組)、單次熱療組(B組)、間隔24小時再次熱療組(C組)、間隔72小時再次熱療組(D組)。長期組中分為腫瘤對照組(E組)、間隔24小時再次熱療組(F組)、間隔72小時再次熱療組(G組)，治療4周。熱療后對腫瘤進行病理研究。 結論:

8、亞高溫盆腔區(qū)域熱療可抑制腫瘤細胞增殖，誘導細胞凋亡，長期的間歇熱療未導致腫瘤細胞出現(xiàn)熱耐受。 第五部分 亞高溫盆腔區(qū)域熱療對浸潤性膀胱腫瘤大鼠免疫狀態(tài)影響的研究 目的:研究不同方案和療程的亞高溫盆腔區(qū)域熱療使原位大鼠浸潤性膀胱腫瘤發(fā)生熱休克反應后機體免疫狀態(tài)的改變。 方法:制備原位大鼠浸潤性膀胱腫瘤動物模型，分為短期組和長期組。用內(nèi)生場熱療系統(tǒng)從體外加熱大鼠盆腔至41℃。對不同方案及不同療程的亞高溫盆腔區(qū)

9、域熱療后腫瘤鼠免疫狀態(tài)的改變進行病理，ELISA檢測血清RatIFN-γ含量。 結論:隨著亞高溫盆腔區(qū)域熱療次數(shù)的增加，腫瘤鼠的免疫細胞重新分布，有利于腫瘤抗原遞呈及效應細胞攻擊腫瘤。 第六部分 亞高溫盆腔區(qū)域熱療聯(lián)合HSP70-PC治療原位大鼠浸潤性膀胱腫瘤的研究 目的;觀察亞高溫盆腔區(qū)域熱療聯(lián)合皮下注射HSP70-PC治療大鼠浸潤性膀胱腫瘤的療效，初步闡釋聯(lián)合治療的機理。 方法:制備原位大鼠浸

10、潤性膀胱腫瘤動物模型，分為A(腫瘤對照組)、B(熱療組)、C(HSP70-PC治療組)、D(聯(lián)合治療組)四組。用內(nèi)生場熱療系統(tǒng)從體外加熱大鼠盆腔至41℃。將亞高溫盆腔區(qū)域熱療與皮下注射HSP70-PC序貫治療一個月后對腫瘤、引流淋巴結、脾臟進行病理研究，檢測血清RatIFN-γ含量。 結論:亞高溫盆腔區(qū)域熱療產(chǎn)生的促進腫瘤細胞凋亡、抑制腫瘤細胞增殖、上調免疫狀態(tài)的作用，與HSP70-PC誘發(fā)的抗腫瘤免疫效應具有協(xié)同互補作用和疊加