帕金森病轉基因小鼠血漿Ghrelin水平的變化及其機制探討.pdf

1、帕金森?。≒arkinson's disease，PD）是一種常見的中老年神經退行性疾病，臨床表現(xiàn)為靜止性震顫、肌張力增高、運動遲緩等。雖然PD已有近二百年的研究歷史，迄今為止，由于PD的發(fā)病機制不明，因此，臨床上尚無有效的治愈PD的方法。根據Braak提出的PD腦內病理進展6級分級學說，黑質病變已經是到達疾病病理階段的第三或第四階段，因此，臨床上，通過運動癥狀的改變診斷的PD病人已經到達疾病的中晚期。如果能在早期診斷PD，即在運動癥狀

2、出現(xiàn)之前診斷PD，并采取適當?shù)纳窠洷Ｗo治療方案，必將對延緩多巴胺能神經元的進一步退行性變和延緩疾病的進展具有重要的意義。而研究已證實，對于散發(fā)性PD病人，在出現(xiàn)運動癥狀之前，往往會出現(xiàn)一些非運動癥狀，如便秘、嗅覺喪失等癥狀。而PD中最先受累的核團包括嗅球和迷走神經背側運動核(dorsal motornucleus of vagus nerve，DMV)。DMV是調節(jié)胃腸道運動和分泌功能的最重要的中樞核團之一，其病理改變可能是導致PD病人

3、出現(xiàn)上述的非運動系統(tǒng)癥狀的原因之一。因此，如果能在血液中找到一種檢測指標，間接反映腦內核團的早期病變，將對PD的早期診斷、早期治療和運動外癥狀的治療具有重要的臨床應用價值。
　　 Ghrelin是1999年由Kojima等人首先從大鼠胃黏膜細胞中發(fā)現(xiàn)的含28個氨基酸殘基的多肽，是生長激素促分泌素受體唯一的內源性配體，主要由胃底的X/A樣細胞分泌，ghrelin主要有兩種分子形式，即第三位絲氨酸辛?；?activeghrelin)

4、和第三位絲氨酸非辛?；痝hrelin。除了胃腸道分泌外，在下丘腦、腸、腎等部位也有少量分泌，但循環(huán)系統(tǒng)的ghrelin大部分來源于胃，其表達調控受多種因素的影響，進食、肥胖等因素都可通過中樞機制或旁分泌機制導致血液中ghrelin水平的變化。Ghrelin的合成和分泌主要受中樞神經系統(tǒng)DMV的膽堿能神經元支配，而DMV恰巧是PD早期受累的核團之一，因此DMV的病變可能會影響血漿ghrelin的水平，而因此血漿ghrelin的水平可能會成

5、為PD中DMV神經元功能損傷的外周標記物。本研究在攜帶人突變型α-synuclein(A53T)轉基因小鼠及與其相對應的野生型小鼠(WT)上，用酶聯(lián)免疫吸附測定法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)測定不同年齡（1月齡，3月齡，6月齡，9月齡，12月齡）的雌雄鼠血漿中ghrelin的水平，并應用尼氏染色法和免疫組織化學方法，分別觀察上述動物延髓DMV神經元和膽堿能神經元數(shù)量的變化，以期在這

6、種PD轉基因小鼠中，觀察疾病的不同進展過程中血漿中ghrelin水平的變化，并分析引起這種變化的可能機制。結果如下:
　　 1.在3月齡，6月齡，9月齡PD轉基因雌鼠中，血漿的總ghrelin(total ghrelin)的水平分別降低了13％，22％和25％，與對照組相比，差別有統(tǒng)計學意義。而1月齡和12月齡的PD轉基因雌鼠，血漿total ghrelin的水平卻未觀察到變化。
　　 2.在3月齡，6月齡，9月齡PD轉

7、基因雄鼠中，血漿total ghrelin水平分別降低了18％，60％和23％，與對照組相比，差別有統(tǒng)計學意義。而1月齡和12月齡的PD轉基因雄鼠，血漿中total ghrelin水平卻未觀察到變化。
　　 3.在3月齡，6月齡，9月齡PD轉基因雌鼠中，血漿有活性的ghrelin(activeghrelin)的水平分別降低了24％，68％和32％，與對照組相比，差別有統(tǒng)計學意義。1月齡PD轉基因雌鼠血漿中active ghrel

8、in的水平升高了10％，與對照組相比，差別有統(tǒng)計學意義。12月齡的PD轉基因雌鼠血漿中active ghrelin的水平未觀察到變化。
　　 4.在3月齡，6月齡，9月齡，12月齡PD轉基因雄鼠中，血漿active ghrelin的水平分別降低了28％，58％和39％，與對照組相比，差別有統(tǒng)計學意義。1月齡PD轉基因雄鼠血漿中active ghrelin的水平升高了21％，與對照組相比，差別有統(tǒng)計學意義。12月齡PD轉基因雄鼠血

9、漿中active ghrelin的水平未觀察到變化。
　　 5.在9月齡PD轉基因雌鼠DMV區(qū)神經元和膽堿能神經元的數(shù)量分別減少了12.46％和12.30％，與對照組相比，差別有統(tǒng)計學意義。而3月齡，6月齡和12月齡PD轉基因雌鼠，DMV區(qū)神經元和膽堿能神經元的數(shù)量未觀察到變化，差別無統(tǒng)計學意義。在12月齡野生型雌鼠中，DMV區(qū)神經元和膽堿能神經元的數(shù)量比3月齡的分別減少了51.28％和22.63％，差別均有高度統(tǒng)計學意義;在1

10、2月齡PD轉基因雌鼠中，DMV區(qū)神經元和膽堿能神經元的數(shù)量比3月齡的分別減少了41.92％和34.89％，差別均有高度統(tǒng)計學意義。
　　 6.在6月齡PD轉基因雄鼠DMV區(qū)神經元和膽堿能神經元的數(shù)量分別減少了20.31％和4.06％，與對照組相比，差別有統(tǒng)計學意義。在9月齡PD轉基因雄鼠DMV區(qū)神經元和膽堿能神經元的數(shù)量分別減少了9.88％和11.06％，與對照組相比，差別有統(tǒng)計學意義。而3月齡和12月齡PD轉基因雄鼠DMV區(qū)神

11、經元和膽堿能神經元的數(shù)量未觀察到變化，差別無統(tǒng)計學意義。在12月齡野生型雄鼠中，DMV區(qū)神經元和膽堿能神經元的數(shù)量比3月齡的分別減少了45.04％和18.03％，差別均有高度統(tǒng)計學意義;在12月齡PD轉基因雄鼠中，DMV區(qū)神經元和膽堿能神經元的數(shù)量比3月齡的分別減少了52.50％和24.88％，差別均有高度統(tǒng)計學意義。
　　 上述結果表明，在PD疾病早期，即可觀察到血漿ghrelin水平的下降，且伴有腦內延髓DMV區(qū)神經元和膽堿