云芝糖肽(PSP)對小鼠巨噬細胞的雙向免疫調(diào)節(jié)及NF-κB信號通路的調(diào)控研究.pdf

1、云芝糖肽(PSP)是從云芝(Trametes versicolor)COV-1菌株深層發(fā)酵培養(yǎng)的菌絲體中提取的肽結(jié)合多糖，是國家Ⅱ類新藥，用于減輕癌癥病人化、放療產(chǎn)生的毒副作用、提高自身免疫力，并用于增強亞健康人群機體免疫力。但云芝糖肽對已存在過度免疫狀態(tài)機體的作用及機理尚不明確。本研究用LPS刺激的小鼠巨噬細胞Raw264.7作為炎癥模型，分析PSP對靜息和LPS過度刺激兩種不同狀態(tài)的巨噬細胞的調(diào)控作用。
　　 ELISA檢測

2、發(fā)現(xiàn)，PSP(25、100μg/ml)單獨作用于細胞時(24h)，有促進IL-1β產(chǎn)生的趨勢，IL-1β濃度分別達到0.76±1.07pg/ml和2.73±1.29pg/ml(對照組為0.76±0.21pg/ml)，但均未達到顯著(p＞0.05)。LPS刺激可促使大量的IL-1β產(chǎn)生，濃度達到8.20±0.43pg/ml(p＜0.05)。PSP(25，100μg/ml)與LPS共同孵育時，IL-1β分泌下降到6.36±0.86和7.12

3、±3.21pg/ml，雖未達到統(tǒng)計學(xué)顯著性(p＞0.05)，但有減弱LPS刺激產(chǎn)生的高IL-1β水平的趨勢。用ELISA檢測25、100μg/ml PSP單獨作用細胞后PGE2的濃度，結(jié)果為114.11±17.67pg/ml和200.25±76.00pg/ml，略高于對照組(95.01±14.70pg/ml)。LPS刺激可促進大量的PGE2產(chǎn)生(419.78±75.70pg/ml)(p＜0.05)，但當(dāng)與PSP(25、100μg/ml)

4、共同孵育時，PGE2的水平分別下調(diào)到146.97±15.20、154.96±58.73pg/ml，其中25μg/ml達到統(tǒng)計學(xué)顯著(p＜0.05)。Western blot結(jié)果顯示，PSP(25、100μg/ml)不影響靜息狀態(tài)細胞COX-2(PGE2合成的關(guān)鍵限速酶)的表達水平，但能降低LPS刺激后的COX-2高表達，且有量效關(guān)系(p＜0.05)。
　　 免疫熒光觀察發(fā)現(xiàn)，對照組細胞中核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB主要分布在細胞質(zhì)，細胞

5、核中少有分布；LPS刺激后，NF-κB大量轉(zhuǎn)移到細胞核中，很少在細胞質(zhì)中分布；PSP單獨作用于靜息狀態(tài)細胞可輕微促進NF-κB的核轉(zhuǎn)移；當(dāng)與LPS共同作用時，則可弱化NF-κB大量向核內(nèi)轉(zhuǎn)移的程度。Western blot檢測進一步發(fā)現(xiàn)，NF-κB主要分布在靜息狀態(tài)細胞的細胞漿內(nèi)。LPS刺激可顯著降低胞漿內(nèi)的NF-κB水平，與免疫熒光觀察結(jié)果相符。PSP單獨作用時也可微弱地降低胞漿內(nèi)的NF-κB水平，但與LPS共同作用時，則可減少LPS

6、刺激所導(dǎo)致的胞漿NF-κB水平顯著下降，有阻滯NF-κB核轉(zhuǎn)移作用。流式細胞分析發(fā)現(xiàn)，PSP可干擾LPS-FITC與巨噬細胞結(jié)合，使細胞熒光強度從2.07±0.42(LPS-FITC組)減少到1.20±0.25(PSP+LPS-FITC組)。這些研究表明，PSP能激活正常靜息狀態(tài)的巨噬細胞，有弱的上調(diào)IL-1β和PGE2產(chǎn)生的能力。但當(dāng)細胞處在過度激活狀態(tài)時，PSP又能下調(diào)LPS誘導(dǎo)產(chǎn)生的大量IL-1β、PGE2等炎癥介質(zhì)，下調(diào)COX-