PSP對(duì)PBMC免疫調(diào)節(jié)機(jī)制及TRAF6-TLR免疫信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的研究.pdf

1、目的:云芝,為多孔菌科真菌,彩絨革蓋菌(Coriolus versicolor,C.versicolor)的子實(shí)體或菌絲體,云芝糖肽(polysaccharopeptide,PSP)為云芝菌株菌絲體培養(yǎng)物提取的生物活性物質(zhì)。目前,PSP在臨床上主要用于輔助放化療,促使放化療后損傷的機(jī)體恢復(fù)免疫機(jī)能。本課題是在課題組前期工作基礎(chǔ)上,采用蛋白芯片檢測(cè)PSP對(duì)健康成人外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood monouclear c

2、ells,PBMC)分泌細(xì)胞因子的影響,并從基因水平和蛋白水平檢測(cè)Toll-like受體(Toll-likereceptors,TLR)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)的mRNA表達(dá)水平和/或蛋白表達(dá)水平,從而探索PSP的免疫信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制,進(jìn)一步驗(yàn)證和探討PSP免疫信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。
　　 方法:體外采用Ficoll液密度梯度離心法分離PBMC,分為PSP組和對(duì)照組。PSP組加入終濃度為25μml的PSP藥液及終濃度為100μg/ml的植物

3、血凝素(Phytohemagglutinin,PHA),對(duì)照組只加終濃度為100μg/ml的PHA。應(yīng)用蛋白芯片檢測(cè)PSP作用于PBMC后分泌細(xì)胞因子的變化。并采用RT-PCR、Western blot等方法,從mRNA和/或蛋白水平研究PBMC經(jīng)PSP作用后,TLR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn),如:含TIR接頭分子(TIR-containing adaptor molecule,TRIF),TRIF相關(guān)接頭分子(TRIF-related

4、adaptor molecule,TRAM9腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6(TNF-receptor associated factor,TRAF6),髓樣細(xì)胞分化因子88(Myeloid different factor88,MyD88),MyD88接頭樣蛋白(MyD88 adaptor-like protein,MAL)以及核轉(zhuǎn)錄因子-κB(nuclear factorκB,NF-κB)等的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:在芯片所包含的

5、23種細(xì)胞因子中,PSP組與對(duì)照組相比上調(diào)≥1.3倍的細(xì)胞因子有5個(gè):G-CSF,GM-CSF,IL-1α,IL-6,IFN-γ；有所降低的因子有3個(gè):IL-2,IL-3,IL-5,對(duì)其他細(xì)胞因子的表達(dá)沒(méi)有顯著影響。TLR信號(hào)通路中,PSP組與對(duì)照組相比,TRAM、TRAF6(P<0.05)和NF-κB(P<0.01)mRNA水平顯著增高,TRIF mRNA水平有所增高,MAL、MyD88 mRNA水平有所降低；TRAF6、TRAM和N