干預(yù)NF-κB信號(hào)通路對(duì)腦星形膠質(zhì)細(xì)胞死亡的影響研究.pdf

1、目的:
　　觀察干預(yù)NF-κ B通路對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞自噬、凋亡和壞死的影響，尋找調(diào)控創(chuàng)傷性腦損傷后星形膠質(zhì)細(xì)胞的繼發(fā)性死亡新的治療靶點(diǎn)。
　　方法:
　　取SPF級(jí)新生SD大鼠的腦皮層提取星形膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)。經(jīng)傳代純化滿意后，將每批細(xì)胞平均分為空白組、激活組、抑制組。激活組給予NF-KB激活劑PMA干預(yù)，抑制組在此基礎(chǔ)上加用NF-KB阻斷劑PDTC干預(yù)。各組細(xì)胞處理1h、6h、12h、24h、48h后，分別應(yīng)用免疫

2、細(xì)胞化學(xué)熒光法測(cè)定NF-κ B蛋白的表達(dá)，應(yīng)用Annexin V/PI染色法檢測(cè)凋亡和壞死，應(yīng)用Western blot檢測(cè)自噬蛋白Beclin1表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　1.本實(shí)驗(yàn)成功進(jìn)行了星形膠質(zhì)細(xì)胞的體外培養(yǎng)，經(jīng)免疫熒光鑒定純度在95％以上。
　　2.隨著作用時(shí)間增加，激活組與抑制組的NF-κB蛋白表達(dá)量逐漸增高，以24h時(shí)間點(diǎn)改變最顯著。激活組6h-48h時(shí)間點(diǎn)與空白組比較均有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)

3、。抑制組12h-48h時(shí)間點(diǎn)NF-κ B蛋白表達(dá)均較激活組明顯減少，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　3.激活組及抑制組細(xì)胞均有不同程度的凋亡及壞死。且隨著作用時(shí)間增加而增加，壞死發(fā)生時(shí)間明顯晚于凋亡。激活組凋亡及壞死程度總體高于空白組與抑制組，12h-48h凋亡檢測(cè)及24h-48h壞死檢測(cè)在三組兩兩比較均有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　4.激活組與抑制組自噬Beclin1蛋白表達(dá)均隨著時(shí)間的增加而表達(dá)增加，

4、較為平緩。激活組各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)均較抑制組及空白組明顯，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，自6h起有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　結(jié)論:
　　本實(shí)通過對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞NF-κ B表達(dá)進(jìn)行干預(yù)，結(jié)果顯示:PMA誘導(dǎo)的NF-κB活化能夠啟動(dòng)星形膠質(zhì)細(xì)胞不同程度的凋亡、壞死及自噬進(jìn)程，而PDTC能夠抑制激活NF-κB通路所誘導(dǎo)的這些程序性死亡進(jìn)程，但不能完全阻斷這些進(jìn)程。同時(shí)，NF-κ B通路激活后，早期細(xì)胞以凋亡和自噬這種細(xì)胞自我保護(hù)形式為主，