青藤堿對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞TLR4-NF-κB信號(hào)通路作用的研究.pdf

1、目的：青藤堿對(duì)許多自身免疫性疾病的炎癥反應(yīng)都具有保護(hù)作用，可用于腎病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、紅斑狼瘡等機(jī)體免疫相關(guān)性疾病的治療。潰瘍性結(jié)腸炎（Ulcerativ e colitis,UC）的發(fā)病也和自身免疫紊亂密切相關(guān)，而關(guān)于青藤堿對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎是否有治療作用，目前未見相關(guān)報(bào)道。本研究旨在探討青藤堿對(duì)脂多糖（Lipopolysacchar ide,LPS）誘導(dǎo)后巨噬細(xì)胞功能的影響，以及青藤堿能否通過TLR4/NF-κB信號(hào)通路抑制炎癥應(yīng)答。<

2、br>　　方法：(1)向7~9周雄性Balb/C小鼠腹腔注射高壓滅菌的5％淀粉肉湯3天后，腹腔灌洗法分離提取出小鼠腹腔的巨噬細(xì)胞，并應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行細(xì)胞表型鑒定；應(yīng)用MTT法進(jìn)行藥物毒性試驗(yàn)。(2)應(yīng)用墨汁吞噬法、Transwell技術(shù)、ELISA技術(shù)分別檢測青藤堿對(duì)巨噬細(xì)胞的吞噬功能、趨化功能以及分泌功能的作用影響。(3)實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)探討青藤堿對(duì)巨噬細(xì)胞TLR4、MyD88 mRNA表達(dá)水平的影響。(4)細(xì)胞免疫熒光技術(shù)檢測青

3、藤堿作用后巨噬細(xì)胞核內(nèi)NF-κB表達(dá)變化。(5)Western-blot方法檢測青藤堿對(duì)巨噬細(xì)胞TLR4、MyD88和p-IκB蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：(1)經(jīng)過腹腔無菌炎癥聯(lián)合LPS（1μg/ml）刺激后，腹腔灌洗法提取出的細(xì)胞經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)鑒定，純度達(dá)95%以上；(2)青藤堿可抑制巨噬細(xì)胞的趨化功能以及分泌功能，但對(duì)吞噬功能無明顯影響；(3)青藤堿可抑制巨噬細(xì)胞TLR4/NF-κB信號(hào)通路中關(guān)鍵因子如TLR4、MyD88、p