降糖三黃片對糖尿病腎病大鼠TLR4-NF-κB信號通路的研究.pdf

1、文獻研究:
　　糖尿病腎病與消渴病日久并發(fā)的“下消”、“腎消”等相關。病因與先天稟賦不足、飲食不節(jié)、房勞過度、情志失調等因素有關，病機以脾胃虧虛、腎陰不足為本，以燥熱、痰飲、水濕、瘀血、濁毒為標。治療以補腎健脾，滋陰清熱為大法，佐以化痰利水、活血化瘀、瀉濁通腑之法?，F(xiàn)代醫(yī)學認為糖尿病腎病的發(fā)生涉及多種因素，如晚期糖基化終末產物蓄積、蛋白激酶C活化、多元醇通路激活、脂代謝紊亂、高血壓、細胞因子等。近年來，越來越多的研究表明炎癥反應在

2、糖尿病腎病的發(fā)病機制中占據重要地位，TLR4/NF-κ B通路是介導炎癥反應的重要信號通路，TLR4能激活NF-κB，增加炎癥因子的表達，促進糖尿病腎病的進展。降糖三黃片是以桃核承氣湯加減研制而成的院內制劑，具有益氣養(yǎng)陰，活血化瘀，瀉熱通腑的功效，在防治糖尿病腎病方面具有一定療效。
　　實驗研究:
　　目的:
　　探究降糖三黃片對糖尿病腎病大鼠腎組織TLR4/NF-κ B信號通路的影響，觀察由TLR4/NF-κ B信號

3、通路誘導的MCP-1的表達，探討降糖三黃片對糖尿病腎病的保護作用及機制。
　　方法:
　　80只SPF級SD大鼠經適應性喂養(yǎng)1周后，按隨機數字表分為正常組10只，造模組70只。造模前大鼠需禁食12小時，不禁水，造模組按45mg/kg劑量腹腔內注射STZ，正常組腹腔內注射等量的檸檬酸緩沖液。造模72小時后，測大鼠空腹血糖，若血糖值＞16.7mmol/L，確認為糖尿病模型。正常組大鼠給予普通飼料進行喂養(yǎng)，造模組大鼠給予高糖高脂飼

4、料進行喂養(yǎng)，繼續(xù)喂養(yǎng)3周。3周后測尿液，尿量＞原尿量的150％、24小時尿蛋白＞30mg/24h，則確認為糖尿病腎病模型。糖尿病腎病模型造模成功的大鼠按隨機數字表進一步分為模型組12只、降糖三黃片低劑量組11只、降糖三黃片中劑量組11只、降糖三黃片高劑量組11只、厄貝沙坦組11只。降糖三黃片低劑量組按675mg/kg·d的劑量灌胃，降糖三黃片中劑量組按1350mg/kg·d的劑量灌胃，降糖三黃片高劑量組按2700mg/kg·d的劑量灌胃

5、，厄貝沙坦組按13.5mg/kg·d的劑量灌胃，灌胃前藥物均用純凈水配成2ml混懸液，每日1次灌胃，連續(xù)8周。正常組及模型組灌服等量蒸餾水。實驗結束時共62只大鼠完成實驗，其中正常組10只，模型組9只，降糖三黃片低劑量組10只，降糖三黃片中劑量組11只，降糖三黃片高劑量組11只，厄貝沙坦組11只。分別在造模72小時后及治療前測大鼠尾尖空腹微量血糖。治療前及治療8周后收集24h尿液測尿蛋白。治療8周后，每只大鼠予腹腔注射10％水合氯醛麻醉

6、，腹主動脈取血，檢測空腹血糖、糖化血紅蛋白、總甘油三脂、總膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、血肌酐、血尿素氮等指標。免疫組化法檢測各組腎組織中TLR4、NF-κ B(p65)、MCP-1蛋白的分布，Western blot法檢測各組腎組織中TLR4、NF-κ B(P-p65)、MCP-1蛋白的表達。
　　結果:
　　1.治療8周后降糖三黃片低、中、高劑量組空腹血糖與模型組相比顯著下降（P＜0.01）;厄貝沙坦組

7、空腹血糖與模型組相比，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。與模型組相比，降糖三黃片低、中、高劑量組糖化血紅蛋白均明顯下降（P＜0.01）;厄貝沙坦組糖化血紅蛋白與模型組相比差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。降糖三黃片低、中、高劑量組TG、TC、LDL-C與模型組相比顯著降低(P＜0.01)。降糖三黃片低、中、高劑量組HDL-C與模型組相比顯著升高，有統(tǒng)計學差異（P＜0.01）。厄貝沙坦TG、TC、LDL-C、HDL-C與模型組相比，差異無

8、統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。降糖三黃片低、中、高劑量組、厄貝沙坦組相對腎重與模型組相比顯著減輕（P＜0.01）。治療8周后，降糖三黃片低、中、高劑量組及厄貝沙坦組24h尿蛋白與模型組相比顯著減少（P＜0.05)。治療8周后，降糖三黃片高劑量組24h尿蛋白與厄貝沙坦組相比無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。降糖三黃片低、中、高劑量組、厄貝沙坦組血肌酐、血尿素氮與模型組相比顯著降低(P＜0.05)。降糖三黃片高劑量組血肌酐、血尿素氮與厄貝沙坦組相

9、比顯著降低(P＜0.01)。
　　2.TLR4、NF-κ B(p65)免疫組化染色結果顯示，降糖三黃片低、中、高劑量組、厄貝沙坦組TLR4平均光密度值與模型組相比顯著降低（P＜0.05)。降糖三黃片高劑量組TLR4平均光密度值與厄貝沙坦組相比無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。降糖三黃片低、中、高劑量組、厄貝沙坦組NF-κ B(p65)平均光密度值與模型組相比顯著降低（P＜0.01)。降糖三黃片高劑量組NF-κB(p65)平均光密度值與

10、厄貝沙坦組相比無統(tǒng)計學差異(P＞0.05）。Western blotting法檢測TLR4、NF-κ B(p65)蛋白表達顯示，降糖三黃片低、中、高劑量組、厄貝沙坦組與模型組相比TLR4蛋白表達量顯著下降（P＜0.01）。降糖三黃片高劑量組TLR4蛋白表達量與厄貝沙坦組相比無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。降糖三黃片低、中、高劑量組、厄貝沙坦組NF-κ B(P-p65)蛋白表達量與模型組相比顯著降低（P＜0.01）。降糖三黃片高劑量組NF-

11、κ B(P-p65)蛋白表達量與厄貝沙坦組相比，無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。
　　3.MCP-1免疫組化染色結果顯示，降糖三黃片低、中、高劑量組、厄貝沙坦組MCP-1平均光密度值與模型組相比顯著降低（P＜0.05)。降糖三黃片高劑量組MCP-1平均光密度值與厄貝沙坦組相比無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。Western blotting法檢測MCP-1蛋白表達顯示，降糖三黃片低、中、高劑量組、厄貝沙坦組MCP-1蛋白表達量與模型組相