白芍總苷抑制口腔扁平苔蘚TLR4-NF-κB信號通路的激活.pdf

1、目的：通過模擬口腔扁平苔蘚(Oral lichen planus，OLP)局部免疫微環(huán)境，研究白芍總苷對TLR4/NF-κB信號通路蛋白及其下游炎癥細胞因子IL-6和TNF-α的作用機制，為闡明白芍總苷的抗炎、抗免疫機制提供實驗基礎。
　　方法：采用免疫組化法檢測 OLP患者局部損害組織和正常對照口腔黏膜組織中Toll樣受體4（Toll-like receptor4，TLR4）和核轉錄因子-κB p65（NF-κB p65）亞基蛋

2、白的表達水平；收集27例口腔扁平苔蘚患者損害黏膜組織和14例正常對照人口腔黏膜組織，采用實時定量熒光PCR方法檢測炎癥細胞因子IL-6和TNF-α水平；采用10μg/mL LPS處理的HaCaT細胞，模擬 OLP局部免疫微環(huán)境。采用酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測不同濃度(1,2.5,5,10μg/mL)的白芍總苷和10μg/mL LPS刺激后的HaCaT細胞培養(yǎng)上清中炎癥細胞因子IL-6和TNF-α表達水平；采用CCK8法檢測1,2.5,5,10

3、μg/mL白芍總苷對HaCaT細胞生長增殖的影響；采用免疫印跡法檢測不同濃度(1,2.5,5,10μg/mL)的白芍總苷處理過的HaCaT細胞中TLR4、磷酸化IκBα蛋白、磷酸化NF-κB p65的表達水平；采用免疫熒光實驗檢測白芍總苷對NF-κB p65亞基入核的影響。
　　結果：OLP患者局部損害組織中TLR4和 NF-κB p65亞基蛋白的表達上調(diào)；OLP損害組織角質(zhì)形成細胞中IL-6和TNF-α的mRNA表達水平較正常對

4、照口腔黏膜組織表達明顯上調(diào)(P<0.05)；1-10μg/mL白芍總苷對細胞增殖沒有影響，但能顯著抑制 HaCaT細胞培養(yǎng)上清中炎癥細胞因子 IL-6和 TNF-α的表達水平(P<0.01)，且有濃度依賴關系；1,2.5,5,10μg/mL白芍總苷能明顯抑制HaCaT細胞中TLR4、磷酸化NF-κB p65亞基(P<0.01)、磷酸化IκBα蛋白的表達(P<0.001)，且有濃度依賴關系；白芍總苷能明顯抑制NF-κB p65亞基入核。<