Ca2+-cAMP信號通路介導(dǎo)的云芝糖肽和黃芪多糖免疫調(diào)節(jié)機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　研究黃芪多糖（Astragalus polysaccharides，APS）和云芝糖肽(Polysaccharopeptide，PSP)對巨噬細(xì)胞第二信使水平的影響，探討免疫類中藥多糖APS和PSP發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)巨噬細(xì)胞RAW264.7，分別用APS、PSP和LPS分別與巨噬細(xì)胞孵育不同的時(shí)間點(diǎn)，Griess法檢測細(xì)胞內(nèi)NO的濃度，然后用光譜法檢測細(xì)胞內(nèi)的PKC，

2、用ELISA法檢測細(xì)胞內(nèi)cAMP、DAG、IP3的含量。然后用激光共聚焦檢測APS、PSP和NiCl2處理后細(xì)胞內(nèi)Ca2+的熒光強(qiáng)度，并檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子TNF-α和IL-6，用來明確細(xì)胞內(nèi)Ca2+對分泌細(xì)胞因子的影響。最后采用熒光定量PCR(Q-PCR)對APS、PSP和NiCl2處理后RAW中NF-κB的表達(dá)情況進(jìn)行定量分析，同時(shí)使用Western blot檢測NF-κB的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　APS和P

3、SP能夠顯著提高巨噬細(xì)胞中的第二信使NO、cAMP、DAG、IP3和Ca2+的含量(P＜0.05)，并且細(xì)胞內(nèi)第二信使含量的升高呈現(xiàn)時(shí)間-依賴效應(yīng)；APS、PSP和LPS處理后，NF-κB的基因水平和蛋白水平都有明顯的上調(diào)(P＜0.05)。當(dāng) Ca2+通道阻滯劑 NiCl2分別與APS和PSP共同處理RAW后，與對照組相比，細(xì)胞內(nèi)Ca2+的熒光強(qiáng)度明顯下降(P＜0.05)，第二信使中的cAMP也隨著Ca2+的內(nèi)流減少而下降，在基因水平和