法舒地爾對(duì)氧化樂果染毒大鼠心股細(xì)胞的保護(hù)作用及機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　 1.采用急性氧化樂果(Omemoate)中毒大鼠模型,研究法舒地爾(HA1077)對(duì)中毒后心肌損害的保護(hù)作用及機(jī)制。
　　 2.采用氧化樂果染毒的離體培養(yǎng)心肌細(xì)胞模型,觀察法舒地爾對(duì)染毒離體心肌細(xì)胞的影響及其可能機(jī)制。
　　 方法：
　　 第一部分:法舒地爾對(duì)急性氧化樂果中毒大鼠心肌損害的保護(hù)作用及機(jī)制
　　 1.40只雄性SD大鼠隨機(jī)分4組(n=10):正常對(duì)照組(NC組)、中毒組

2、(PC組)、阿托品治療組(AT組)、法舒地爾邯可托品治療組(UN組)。
　　 2.采用腹腔注射氧化樂果(160mg/kg)制作中毒模型。染毒后3min,AT組、UN組給予阿托品(10mg/kg)肌肉注射,之后根據(jù)大鼠流涎、瞳孔大小等情況確定阿托品用藥次數(shù);其中,UN組在注射阿托品后即刻又給予法舒地爾腹腔注射、繼而以q8h維持治療;對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn),AT組和PC組腹腔注射等容積的生理鹽水。NC組僅給予等容積的生理鹽水腹腔注射。各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)

3、物觀察48h后脫頸處死或者中毒死亡后立即開胸取出心臟留取標(biāo)本。
　　 3.采用HE染色、Tunel法,免疫組化染色,觀察各組心肌標(biāo)本的病理學(xué)改變、心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)及Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)水平的變化情況。
　　 第二部分:法舒地爾對(duì)氧化樂果染毒大鼠培養(yǎng)心肌細(xì)胞的影響及其機(jī)制
　　 1.在Langendorff裝置上,用膠原蛋白酶逆灌注分離出雄性SD大鼠心肌細(xì)胞(CM),DMEM中常規(guī)培養(yǎng)。
　　 2.按

4、培養(yǎng)基中氧化樂果劑量,分為低劑暈中毒組(LP)、中劑量中毒組(MP)和高劑量中毒組(HP)。培養(yǎng)12h,根據(jù)各組CM的存活率,選取理想的劑量進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。
　　 3.按培養(yǎng)基中法舒地爾劑量,分為低劑量法舒地爾組(LH)、中劑量法舒地爾組(MH)和高劑量法舒地爾組(HH)。培養(yǎng)12h,根據(jù)各組CM的存活率,選擇最佳法舒地爾劑量進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。
　　 4.根據(jù)CM的存活率結(jié)果,選擇正常對(duì)照組(NC)、MP組、MH組進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)。在

5、3h、6h、12h及24h時(shí),測(cè)定各組CM的收縮幅度。培養(yǎng)12h,收集各組細(xì)胞培養(yǎng)基及細(xì)胞蛋白,測(cè)定培養(yǎng)基中的LDH含量及心肌細(xì)胞Bcl-2和Bax蛋白的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:
　　 第一部分:法舒地爾對(duì)急性氧化樂果中毒大鼠心肌損害的保護(hù)作用及機(jī)制
　　 1.各中毒組大鼠生存狀況和中毒癥狀的變化
　　 PC組大鼠于染毒后29±6.3 min全部死亡。在染毒后48 h,UN組9只大鼠存活,1只于第28 h

6、死亡;AT組7只存活,3只死亡(死亡時(shí)間,23.3±2.1 h)。與AT組比較,UN組大鼠中毒程度減輕,癥狀消失時(shí)間提前,其中肌力、肌顫差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 2.各組大鼠心肌AI變化
　　 與NC組比較,AT組、UN組心肌AI顯著升高(P＜0.01),PC組心肌AI略有升高,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與AT組比較,UN組心肌AI顯著降低(P＜0.01)。
　　 3.各組大鼠心肌組織的Bax、Bcl-

7、2蛋白表達(dá)的變化
　　 與NC組比較,AT組、UN組心肌組織的Bax蛋白表達(dá)增加、Bcl-2蛋白表達(dá)減少、Bax/Bcl-2比值升高(P＜0.01),PC組心肌組織的Bcl-2蛋白表達(dá)明顯減少(P＜0.05),Bax蛋白表達(dá)增加、Bax/Bcl-2比值升高,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與AT組比較,UN組心肌組織的Bax蛋白表達(dá)減少,Bcl-2蛋白表達(dá)增加,Bax/Bcl-2比值下降(P＜0.01)。
　　 4.各組大鼠心肌組織的病

8、理形態(tài)學(xué)變化
　　 PC組可見血管充血明顯,間質(zhì)水腫,未見肌纖維紊亂、壞死灶等。AT組可見心肌間質(zhì)水腫、血管充血、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、肌纖維紊亂、局灶性肌纖維斷裂、溶解壞死灶等。與AT組比較,UN組病理病變明顯減輕,未見壞死灶。NC組心肌組織結(jié)構(gòu)清晰,未見異常。
　　 第二部分:法舒地爾對(duì)氧化樂果染毒大鼠培養(yǎng)心肌細(xì)胞的影響及其機(jī)制
　　 1.中毒組間CM存活率的變化
　　 與NC組比較,各中毒組CM存活率均有顯

9、著地降低(P＜0.01):中毒劑量越高,CM存活率越低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 2.HA1077組間CM存活率的變化
　　 與MP組比較:LH組和MH組CM存活率明顯升高(P＜0.05 or P＜0.01);HH組存活率略下降,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3.各組CM收縮幅度的變化
　　 與NC組比較,MP組和MH組CM收縮幅度在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)明顯減小(P＜0.01)。與MP組比較,MH組C

10、M收縮幅度增大,12h時(shí)最為明顯(P＜0.01)。
　　 4.各組培養(yǎng)基LDH含量的變化
　　 與NC組比較,MP組和MH組LDH明顯升高(P＜0.01)。但與MP組比較,MH組LDH含量降低(P＜0.01)。
　　 5.各組CM中Bax、Bcl-2蛋白的表達(dá)
　　 與NC組比較,MP組和MH組心肌細(xì)胞Bax蛋白表達(dá)增加、Bcl-2蛋白表達(dá)減少,Bax/Bcl-2比值升高(P＜0.01);與MP組比較,M

11、H組心肌細(xì)胞Bax蛋白表達(dá)減少、Bcl-2蛋白表達(dá)增加,Bax/Bcl-2比值下降(P＜0.01)
　　 結(jié)論:
　　 第一部分:
　　 ①法舒地爾對(duì)急性氧化樂果中毒大鼠的心肌損害有保護(hù)作用,可降低急性氧化樂果中毒大鼠的死亡率。
　　 ②抑制Bax蛋白表達(dá)、促進(jìn)Bcl-2蛋白表達(dá),降低Bax/Bcl-2蛋白的比值,進(jìn)而抑制心肌細(xì)胞凋亡是法舒地爾對(duì)氧化樂果染毒后心肌損害起保護(hù)作用的重要機(jī)制之一。