冠心舒通對大鼠腦缺血再灌注損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、腦缺血再灌注損傷(Cerebral ischemia—reperfusion injury)是指腦缺血一定時間后恢復(fù)血液灌注出現(xiàn)的腦組織損傷進(jìn)一步加重,包括缺血期原發(fā)性損傷和再灌注繼發(fā)性損傷,其發(fā)生機(jī)制尚未闡明。再灌注損傷是多種因素相互作用的結(jié)果。研究表明,血管再生是決定缺血性神經(jīng)元存活的關(guān)鍵因素,超早期恢復(fù)缺血半暗帶區(qū)血流是改善組織損傷的關(guān)鍵。新生血管的產(chǎn)生是血管內(nèi)皮因子作用的結(jié)果,VEGF是迄今為止發(fā)現(xiàn)的唯一一種血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性有

2、絲分裂原。在缺血、缺氧等病理?xiàng)l件下能誘導(dǎo)新生血管形成,促進(jìn)側(cè)枝循環(huán),抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡。本研究通過對神經(jīng)功能缺損評分分組,測定各組大鼠不同時間點(diǎn)腦梗死體積、腦室HE染色、腦室VEGF及巢蛋白抗體免疫組織化學(xué)染色及大鼠腦組織勻漿血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)測定,巢蛋白抗體的免疫熒光強(qiáng)度測定,探討冠心舒通在腦缺血再灌注損傷病中的保護(hù)作用,為臨床應(yīng)用冠心舒通治療缺血性腦血管病提供理論依據(jù)。
　　 目的:通過線栓法制作大鼠局灶性腦缺血再灌

3、注損傷模型,測量腦梗塞體積、腦室HE染色、腦室VEGF及巢蛋白抗體的免疫組織化學(xué)染色及腦組織勻漿的VEGF測定、巢蛋白抗體的免疫熒光染色的陽性細(xì)胞熒光強(qiáng)度值的實(shí)驗(yàn)研究,探討冠心舒通對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。
　　 方法:采用健康雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為冠心舒通高劑量和低劑量組,缺血再灌注組(模型組)和假手術(shù)組,每組各10只。缺血120min,再灌注6h、12h、24h、48h、72h。通過對神經(jīng)功能缺損評分分組,2,

4、3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色,測定腦梗死體積；腦室HE染色、腦室VEGF及巢蛋白抗體的免疫組織化學(xué)染色,觀察神經(jīng)細(xì)胞損傷變化；大鼠腦缺血再灌注損傷3d、7d測定腦組織勻漿VEGF；巢蛋白抗體的免疫熒光染色測定陽性細(xì)胞熒光強(qiáng)度值。
　　 結(jié)果:TTC染色6h、12h、24h高劑量組腦梗死體積與模型組比較明顯縮小(p<0.05),24h、48h高劑量及低劑量組腦梗死體積縮小,以24h梗死體積縮小更明顯(p<0.05)。腦室

5、HE染色各組40倍均未見病變。缺血再灌注組:病變有隨時間延長而逐漸加重的趨勢,72h>48h>24h>12h>6。低劑量組:病變趨勢6h<12h<或=24h<48h<72h。高劑量組的細(xì)胞形態(tài)變化明顯好于低劑量組及缺血再灌注組,其中高劑量24h組神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)接近正常。腦室VE6F免疫組化染色,6h、12h、24h、48h、72h對皮質(zhì)神經(jīng)元無明顯影響；12h、24h的高劑量與低劑量均對白質(zhì)神經(jīng)元有明顯影響,而高劑量72h無明顯影響。低

6、劑量48h、72h及高劑量12h、24h、48h、72h對毛細(xì)血管均有明顯影響。腦室巢蛋白免疫組化染色,6h、12h高劑量組對皮質(zhì)有明顯影響。假手術(shù)組大鼠腦勻漿中血管內(nèi)皮生長因子有表達(dá),連續(xù)給藥7d的高劑量組、低劑量組與缺血再灌注組比較均有明顯表達(dá)(p<0.05)。缺血再灌注組VE6F比假手術(shù)組升高,3d組高劑量及低劑量升高均不明顯。熒光強(qiáng)度比較,缺血再灌注損傷3d,模型組損傷側(cè)皮層、室管膜區(qū)(SVZ)均有巢蛋白表達(dá)(Nestin),隨