法舒地爾對兔股靜脈移植物內(nèi)膜增厚作用的實驗研究.pdf

1、目的：血管損傷是創(chuàng)傷骨科常見問題，約1/3動脈損傷病例需要血管替代物進行修復(fù)。自體靜脈移植是治療中小動脈缺損的首選方法。靜脈移植物受到諸如缺血、機械損傷和血流動力學(xué)變化等多種因素影響，出現(xiàn)一系列適應(yīng)性變化。這些變化包括靜脈內(nèi)皮細(xì)胞脫落，炎性細(xì)胞沉積，中膜平滑肌細(xì)胞增殖并遷移至內(nèi)膜，細(xì)胞外基質(zhì)在內(nèi)膜沉積，進而引起內(nèi)膜增厚，最終導(dǎo)致血管腔發(fā)生狹窄甚至阻塞。據(jù)統(tǒng)計，靜脈移植術(shù)后5年供體血管狹窄發(fā)生率達30％～50％。目前研究熱點主要集中在靜脈

2、移植物再狹窄的成因與防治上。法舒地爾是一種Rho激酶抑制劑，具有降低內(nèi)皮細(xì)胞通透性，抑制內(nèi)皮細(xì)胞脫落，減緩平滑肌細(xì)胞增殖、遷移，減少炎性因子分泌的作用。本研究采用家兔作為實驗對象，建立自體股靜脈-股動脈移植模型，靜點法舒地爾干預(yù)。取材后對移植靜脈進行組織形態(tài)學(xué)觀察，測定內(nèi)膜厚度；透射電鏡觀察細(xì)胞與基質(zhì)的超微結(jié)構(gòu)變化；增殖性細(xì)胞核抗原(PCNA)免疫組織化學(xué)染色觀察細(xì)胞增殖情況；脫氧核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的脫氧三磷酸尿苷(dUTP)缺口末端

3、標(biāo)記法(TUNEL)法測調(diào)亡細(xì)胞所占比例。通過以上研究來探討Rho激酶與移植靜脈內(nèi)膜增厚和管腔狹窄的關(guān)系及法舒地爾對移植靜脈狹窄的防治作用及機制。 方法：選取體重2.3-2.5kg新西蘭白兔24只，隨機分為A組(對照組)和B組(法舒地爾處理組)，每組12只。每只動物行兩側(cè)股動脈缺損自體靜脈移植術(shù)。B組動物每日給予鹽酸法舒地爾30mg/kg靜點自術(shù)前3天直至取材，A組給予0.9％氯化鈉注射液靜點做空白對照。術(shù)后3天各組動物每日肌注

4、肝素鈉500u/kg抗凝、青霉素80萬u預(yù)防感染。術(shù)后2、4周取材，每次每組處死6只動物。蘇木素-伊紅(HE)染色行組織形態(tài)學(xué)觀察，并測定內(nèi)膜厚度，電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)，免疫組織化學(xué)方法檢測PCNA陽性細(xì)胞比例，TUNEL法檢測原位調(diào)亡細(xì)胞比例，使用計算機圖像分析系統(tǒng)進行圖像分析。SPSS11.0統(tǒng)計軟件處理實驗數(shù)據(jù)，兩組比較采用t/t'檢驗。結(jié)果1大體觀察動物術(shù)中及術(shù)后無死亡、傷口感染及移植靜脈破裂大出血，移植靜脈的術(shù)后即刻及取材時通暢率

5、均為100％。 2組織形態(tài) HE染色顯示正常靜脈內(nèi)膜主要為單層扁平上皮。術(shù)后AB組內(nèi)膜均可見增厚，術(shù)后2周，A組家兔內(nèi)膜(μm)(44.83±3.53)較B組(30.33±3.23)明顯增厚(P<0.05)；術(shù)后4周，A組家兔內(nèi)膜厚度(μm)(66.16±8.45)較B組(43.11±4.92)增加(P<0.05)。 電鏡觀察A組移植術(shù)后2周即可見平滑肌細(xì)胞體積增大，分泌型平滑肌細(xì)胞增加；術(shù)后4周內(nèi)膜中可見大量平

6、滑肌細(xì)胞，中膜平滑肌細(xì)胞間質(zhì)及膠原纖維明顯增多。B組術(shù)后2周平滑肌細(xì)胞未見明顯增大；術(shù)后4周平滑肌細(xì)胞略有增大，分泌型平滑肌細(xì)胞有所增加。 3靜脈PCNA免疫組化染色術(shù)后2周，A組內(nèi)膜PCNA陽性細(xì)胞百分比分別為(20.08±3.56)％，較B組百分?jǐn)?shù)(14.28±2.76)％明顯增加；術(shù)后4周兩組內(nèi)膜PCNA的陽性細(xì)胞數(shù)均減少，A組內(nèi)膜PCNA陽性細(xì)胞百分比(8.73±1.35)％，較B組(7.61±1.06)％增多(P<0.

7、05)。 4TUNEL測定細(xì)胞原位凋亡B組移植靜脈2周和4周時內(nèi)膜中陽性細(xì)胞所占比例(3.55±0.36)％和(1.22±0.18％)比A組(1.11±0.31)％和(0.55±0.11)％明顯增多，二者差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論：法舒地爾抑制細(xì)胞增殖、遷移的作用使移植靜脈內(nèi)膜增厚速度和程度下降，減輕血管狹窄，有利于維持移植靜脈血管的通暢和遠端肢體的供血。此研究結(jié)果為臨床預(yù)防移植靜脈再狹窄提供了一種可行的