DFP對鋁染毒大鼠生殖系統(tǒng)保護作用機制的研究.pdf

1、【目的】
　　 隨著科學技術的進步，鋁的生物毒性作用逐漸被發(fā)現并受到普遍關注。鋁在自然界普遍存在，人們在日常生活中會攝入大量的鋁，并在體內蓄積產生多種毒性作用。目前其神經系統(tǒng)毒性已受到廣泛關注，很多研究發(fā)現鋁可引起多種神經退行性疾病，如老年性癡呆、透析性腦病等。另外鋁還可以妨礙正常的鈣、磷代謝，抑制機體內的抗氧化系統(tǒng)，引起骨組織損害、生殖功能降低、貧血以及其他疾病。鋁引起機體生殖功能障礙的機制主要有抑制抗氧化系統(tǒng)作用，改變酶的活

2、力，影響遺傳物質合成等。對于金屬負荷過多引起的疾病，一般傾向于采用其螯合劑來治療。人們曾經嘗試過多種螯合劑用于鋁的排出，結果均不太理想。本研究把DFP（1，2-"甲基-3-羥基-4-吡啶酮，去鐵酮）作為一種鋁的新型螯合劑，以Wistar大鼠為實驗動物，將其生殖系統(tǒng)作為靶器官，研究DFP對鋁負荷過多引起的生殖損傷的保護作用，探討其作用機理，為開發(fā)一種新的臨床應用排鋁藥物提供依據。
　　 【方法】
　　 動物實驗
　　

3、 實驗動物選用健康雄性Wistar大鼠35只，體重180g～220g，自由飲水及進食。動物按照體重隨機分成5組：陰性對照組、鋁對照組、DFP低劑量組、DFP中劑量組和DFP高劑量組。大鼠以灌胃方式給藥，每周連續(xù)給藥五天，間隔兩天后繼續(xù)給藥，制造鋁慢性中毒模型。陰性對照組每同給予lml生理鹽水，其余各組均以劑量為172.5mg/(kg.d)的氯化鋁溶液灌胃，染毒時程為8周。造模成功后，DFP各組給予不同劑量的DFP解毒，陰性對照組及鋁對

4、照組以lml生理鹽水代替。解毒2周后，大鼠禁食24小時，內眥取血，處死，解剖出睪丸附睪等，冰箱內冷藏備用。
　　 2.大鼠一般情況及臟器系數
　　 大鼠每日觀察一般情況及稱重，并根據體重給予相應劑量灌胃。記錄大鼠每日體重，繪制體重變化曲線，比較變化是否有差異。大鼠處死后，解剖出睪丸、附睪，稱重并計算臟器系數，各組織供其他實驗使用。
　　 3.DFP排鋁效果及對必需元素的影響
　　 稱取各組大鼠睪丸組織，用

5、微波消解儀進行消化。采用石墨爐原子吸收光譜法測定鋁元素，火焰原子吸收光譜法測定銅、鋅、鈣、鐵和鎂元素。觀察DFP排鋁效果和對睪丸組織中必需元素的影響。
　　 4.DFP對鋁染毒大鼠睪丸組織中抗氧化系統(tǒng)的影響
　　 稱取大鼠睪丸組織制成勻漿。測定其中超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量，研究DFP對鋁負荷導致睪丸中抗氧化系統(tǒng)損傷的恢復作用。
　　 5.DFP對鋁染毒大鼠睪丸標志酶的影響
　　

6、稱取大鼠睪丸組織制成勻漿。測定其中睪丸標志酶乳酸脫氫酶(LDH)和B-葡糖苷酸酶(B-G)的活力，研究DFP對鋁染毒所致睪丸標志酶活性降低的恢復作用。
　　 6.DFP對鋁染毒大鼠遺傳物質的影響
　　 大鼠最后一次灌胃后禁食24小時，內眥取血作外周血嗜多染紅細胞(PCE)微核試驗，觀察DFP對鋁染毒所致細胞遺傳毒性的恢復作用，推斷DFP對于鋁損傷生殖細胞的影響。
　　 7.DFP對鋁染毒大鼠精子形態(tài)的影響

7、　　 大鼠附睪在生理鹽水中剪碎，過濾后在玻片上涂布，伊紅染液染色制作附睪精子涂片，光鏡下觀察精子形態(tài)，計數畸變數目，計算畸形率，研究DFP對于鋁染毒導致精子畸形的恢復作用。
　　 8.DFP對鋁染毒導致大鼠睪丸組織損傷恢復的形態(tài)學觀察
　　 取大鼠睪丸組織固定、制作石蠟切片，蘇木素-伊紅(HE)染色，顯微鏡下進行病理學觀察，研究DFP對于鋁染毒大鼠睪丸組織損傷的恢復作用。
　　 【結果】
　　 1.DF

8、P對大鼠一般情況的影響
　　 各組大鼠一般情況良好，體重變化趨勢無顯著差異，睪丸、附睪重量及臟器系數各組間比較均未見顯著差異。
　　 2.DFP排鋁效果及對必需元素的影響
　　 鋁對照組大鼠睪丸中的鋁含量明顯高于陰性對照組(P<0.01): DFP各組鋁含量均低于鋁對照組(P<0.01）。Fe、Zn、Ca、Mg、Cu元素在各組之間比較均沒有顯著差異。
　　 3.DFP對鋁染毒大鼠睪丸組織中抗氧化系統(tǒng)的影響

9、
　　 鋁對照組大鼠睪丸組織中SOD活性低于陰性對照組(P

10、差異。
　　 4.DFP對鋁染毒大鼠睪丸標志酶的影響
　　 鋁對照組大鼠睪丸組織中β-G活力低于陰性對照組(P<0.05);DFP各組β-G活力較鋁對照組升高，且呈一定的劑量反應關系，高劑量組與鋁對照組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。DFP各組β-G活性與陰性對照組無明顯差異。鋁對照組LDH活性低于陰性對照組(P　　 5.

11、DFP對鋁染毒大鼠遺傳物質的影響
　　 鋁對照組和DFP各劑量組大鼠外周血嗜多染紅細胞微核率均高于陰性對照組(P<0.05)；DFP中、高劑量組微核率低于鋁對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05）；DFP低劑量組與鋁對照組比較無顯著差異。
　　 6.DFP對鋁染毒大鼠精子形態(tài)的影響
　　 鋁對照組大鼠精子畸形率高于陰性對照組(P

12、反應關系，其中DFP中、高劑量組與鋁對照組之間的差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　 7.DFP對鋁染毒導致大鼠睪丸組織損傷恢復的形態(tài)學觀察
　　 相對于陰性對照組，鋁對照組大鼠睪丸組織鏡下發(fā)現，精曲小管明顯萎縮，管壁變薄，細胞層數明顯減少，精細胞減少，結構不清，部分管壁細胞脫落形成空洞。DFP各組有不同程度的恢復。
　　 【結論】
　　 l.DFP可以明顯促進大鼠睪丸組織中鋁的排出，降低組織內鋁的

13、含量，而對于機體必需微量元素代謝基本不產生影響。
　　 2.DFP能夠減少鋁染毒大鼠睪丸組織脂質過氧化的發(fā)生，維持正常生理功能。
　　 3.DFP能夠恢復鋁染毒導致的大鼠部分睪丸標志酶的活性損傷，改善生殖功能。
　　 4.DFP能夠降低鋁染毒導致的大鼠紅細胞微核率上升，精子畸形增多，對鋁導致遺傳物質的損傷有一定的改善作用。
　　 5.對睪丸組織進行病理學觀察，鏡下可見DFP能夠對于鋁染毒引起的大鼠睪丸組織