青春期前DEHP染毒對(duì)雌性大鼠青春期生殖系統(tǒng)的影響及機(jī)制探討.pdf

1、目的：通過大鼠青春期前(PND21)經(jīng)口給予不同劑量DEHP進(jìn)行染毒，觀察青春期及以后雌性大鼠生殖系統(tǒng)的變化，探討DEHP染毒后對(duì)雌性大鼠生殖系統(tǒng)的影響及作用機(jī)制。從而探討其對(duì)人類生殖健康的潛在危害，目前DEHP對(duì)雄性生殖系統(tǒng)的研究較多，但對(duì)雌性生殖系統(tǒng)的報(bào)道較少，本研究彌補(bǔ)了當(dāng)前DEPH染毒對(duì)雌性性腺卵巢毒性方面研究資料的不足，并為全面評(píng)估DEHP的毒性作用提供了科學(xué)依據(jù)。
　　 方法：實(shí)驗(yàn)一：SPF級(jí)斷奶后(PND21)的雌

2、性SD大鼠30只隨機(jī)分成三組：正常對(duì)照組10只、低劑量組10只、高劑量10只。對(duì)照組給予0．5ml玉米油，后兩組組每天給予不同劑量的DEHP(低劑量組100mg/kg．d，高劑量組750mg/kg．d)，每天稱量每只大鼠的體重，計(jì)算所需灌胃的DEHP的量，將DEHP溶于玉米油中(溶劑)，每只大鼠每天灌胃的總體積為0．5ml．(DEHP和玉米油混合后的總量)(1ml的DEHP重約1g)。灌胃時(shí)間從PND21開始，到PND84結(jié)束，在PND

3、49到PND84期間，觀察陰道開口時(shí)間和動(dòng)情周期的改變，在PND85-88的動(dòng)情間期處死動(dòng)物。實(shí)驗(yàn)二：為了降低個(gè)體差異，對(duì)來(lái)自同一窩的雌性大鼠標(biāo)記，根據(jù)體重和各窩隨機(jī)分成3組，組別、各組大鼠數(shù)量、DEHP劑量以及檢測(cè)觀察項(xiàng)目同實(shí)驗(yàn)一。檢測(cè)指標(biāo)：(1)整體檢查，一般毒性反應(yīng)，陰道開口時(shí)間(VO)和動(dòng)情周期(2)RIA法檢測(cè)血清激素水平：T，E2，F(xiàn)SH，TH；血清膽固醇水平(3)取出左側(cè)新鮮的卵巢，10％的福爾馬林固定，常規(guī)石蠟切片，光鏡

4、下觀察組織學(xué)。(4)取右側(cè)新鮮卵巢組織，制作卵巢組織勻漿，提取總RNA，用RT-PCR方法觀察卵巢顆粒細(xì)胞基因StAR、CYPl7，CYP19，P450scc，3p-HSD,17-HSD mRNA的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 1、一般項(xiàng)目的檢查：實(shí)驗(yàn)一及實(shí)驗(yàn)二DEHP染毒各組未見明顯毒性反應(yīng)，在實(shí)驗(yàn)一，與正常對(duì)照組比較，從PND21到PND63，低劑量組和高劑量組大鼠的平均體重均輕度下降，并且高劑量組體重下降明顯。在

5、實(shí)驗(yàn)二，平均體重?zé)o明顯變化。
　　 2、青春期發(fā)育的改變。DEHP改變了雌性大鼠陰道開口的時(shí)期和第一次動(dòng)情周期出現(xiàn)時(shí)的體重。實(shí)驗(yàn)一和實(shí)驗(yàn)二中，陰道開口時(shí)間和第一次動(dòng)情周期均提前，在實(shí)驗(yàn)一，對(duì)照組、低劑量組、高劑量組大鼠陰道開口時(shí)間分別發(fā)生在PND32．0、30．3和PNDs29．7，在實(shí)驗(yàn)二，DEHP對(duì)陰道開口時(shí)間的影響與實(shí)驗(yàn)一類似。在實(shí)驗(yàn)一，對(duì)照組、地劑量組和高劑量組第一次動(dòng)情周期分別出現(xiàn)在PND32．7、30．6HE29．8

6、。在實(shí)驗(yàn)二，DEHP對(duì)第一次動(dòng)情周期的影響與實(shí)驗(yàn)一類似。與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)一和實(shí)驗(yàn)二中大鼠陰道開口和第一次動(dòng)情周期發(fā)生時(shí)的體重均為明顯降低。
　　 3、動(dòng)情周期，生殖內(nèi)分泌改變，血清FSH、LH、T、E2的濃度。在實(shí)驗(yàn)二，與正常對(duì)照組(14％)及低劑量組(12％)比較，不規(guī)則動(dòng)情周期在高劑量組(29％)出現(xiàn)更頻繁(P<0．05)。在實(shí)驗(yàn)一，在動(dòng)情間期處死動(dòng)物，血清FSH、LH、E2濃度無(wú)明顯改變，而血清睪酮濃度在DEHP染毒組呈

7、降低趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在處死動(dòng)物當(dāng)天觀察生殖內(nèi)分泌狀態(tài)(動(dòng)情間期，動(dòng)情前期和動(dòng)情期)，通過卡方檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，DEHP不影響雌性大鼠內(nèi)分泌狀態(tài)。在實(shí)驗(yàn)二中，高劑量組血清E2(與對(duì)照組比較)和LH(與對(duì)照組和低劑量組比較)輕度升高。由于樣本量較小，尚不能完全統(tǒng)計(jì)動(dòng)情周期中各時(shí)期血清激素水平。
　　 4、血清膽固醇水平和編碼卵巢雌二醇生物合成酶的基因水平表達(dá)量的改變。與正常組比較，DEHP暴露各組大鼠血清膽固醇水平在實(shí)驗(yàn)一中顯著降低，