900MHz電磁輻照對SD大鼠生殖系統(tǒng)影響以及化橘紅提取物保護(hù)作用的探討.pdf

1、本文圍繞900MHz電磁輻照是否能夠?qū)D大鼠生殖系統(tǒng)造成影響以及化橘紅醇提物對該影響的保護(hù)功能研究為主要研究內(nèi)容。分別采用形態(tài)學(xué)觀察、組織切片、生理生化檢測等方法對SD大鼠睪丸組織以及精子懸液內(nèi)活性氧以及細(xì)胞凋亡率等進(jìn)行研究。結(jié)果顯示900MHz電磁輻照能夠使得SD大鼠精子以及睪丸組織細(xì)胞內(nèi)的活性氧濃度、丙二醛濃度、LDH酶活、GSH-Px酶活以及細(xì)胞凋亡率升高，同時(shí)總抗氧化力、細(xì)胞數(shù)量、SOD酶活下降。利用Western、RT-qP

2、CR等手段對凋亡相關(guān)基因進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)900MHz電磁輻照可以使得bax、cytochrome c以及caspase-3基因表達(dá)上調(diào)而bcl-2基因表達(dá)下調(diào)。此外通過蛋白組學(xué)研究發(fā)現(xiàn)900MHz電磁輻照對SD大鼠睪丸組織多條代謝通路都存在有影響。研究還發(fā)現(xiàn)在輻照過程中同時(shí)灌食化橘紅醇提物(100mg/kg)，上述輻照影響均能夠恢復(fù)到正常水平。主要研究結(jié)果如下:
　　1.化橘紅黃酮類物質(zhì)提取工藝優(yōu)化以及成分分析
　　以干燥化橘紅

3、粉末為原料，采用乙醇作為浸提溶劑，在單因素的基礎(chǔ)上，用響應(yīng)面設(shè)計(jì)優(yōu)化工藝。結(jié)果顯示利用70％乙醇，按照1∶60固液比在50℃條件下提取5.5h，化橘紅黃酮類物質(zhì)的得率最大，能夠達(dá)到5.52％。乙醇體積分?jǐn)?shù)對提取有極顯著性影響，料液比對提取有顯著性影響，提取時(shí)間和提取溫度對提取有影響但不顯著。HPLC檢測結(jié)果顯示提取物中主要含有柚皮苷，柚皮苷含量達(dá)到提取物的88.98％。
　　2.900MHz射頻輻射對SD大鼠精子的影響研究

4、　　900MHz電磁輻照對SD大鼠體重和附睪重量、精子畸形率（包括頭部和尾部畸形）沒有顯著性影響，但能夠顯著降低SD大鼠附睪體重比、精子數(shù)量、精子懸液的TAOC、bcl-2表達(dá)。同時(shí)能夠顯著升高精子細(xì)胞凋亡和壞死比例、精子懸液的ROS以及MDA值以及bax, cytochrome c以及caspase-3的表達(dá)。其中雖然900MHz電磁輻照對SD大鼠精子畸形率沒有顯著性影響，但在形態(tài)學(xué)觀察中發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過900MHz電磁輻照過的SD大鼠精子

5、出現(xiàn)雙頭、雙尾以及尾部卷曲畸形的概率較高。同時(shí)，電鏡結(jié)果顯示輻照后的SD大鼠精子出現(xiàn)外層厚壁纖維缺失、頭尾連接處膨脹等微觀結(jié)構(gòu)發(fā)生變化。上述結(jié)論說明900MHz電磁輻照使得SD大鼠生殖系統(tǒng)出現(xiàn)氧化應(yīng)激現(xiàn)象導(dǎo)致凋亡相關(guān)基因表達(dá)出現(xiàn)異常從而使得精子數(shù)量減少。
　　3.900MHz射頻輻射損傷SD大鼠睪丸組織的研究
　　900MHz電磁輻射對于SD大鼠體重、睪丸重、睪丸體重比、睪丸生精小管的直徑?jīng)]有顯著性影響，但是生精小管中生精上

6、皮連接疏松且出現(xiàn)空洞現(xiàn)象。生精小管中央腔內(nèi)精子數(shù)明顯減少，生精小管各級生精細(xì)胞排列紊亂甚至出現(xiàn)壞死、脫落等現(xiàn)象。輻照使得SD大鼠睪丸組織凋亡細(xì)胞增加。睪丸組織勻漿ROS、MDA值升高、總抗氧化能力下降。同時(shí)SOD酶活下降、GSH-Px以及LDH酶活上升。
　　蛋白組學(xué)實(shí)驗(yàn)顯示輻照后SD大鼠睪丸組織中共有378個蛋白表達(dá)發(fā)生了顯著性改變，其中有179個蛋白是上調(diào)蛋白，199個蛋白為下調(diào)蛋白;差異蛋白代謝通路富集分析發(fā)現(xiàn)，900MHz

7、電磁輻射使得SD大鼠睪丸組織在精氨酸、脯氨酸合成路徑，甾醇類激素生物合成，PPAR通路，凋亡通路以及PI3k-Akt通路等代謝通路存在有差異表達(dá)蛋白。RT-qPCR驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)與凋亡相關(guān)基因在轉(zhuǎn)錄水平上的表達(dá)情況與iTRAQ蛋白組學(xué)所得數(shù)據(jù)一致。說明900MHz電磁輻射產(chǎn)生的氧化應(yīng)激壓力造成SD大鼠睪丸細(xì)胞凋亡以及PI3k-Akt途徑蛋白表達(dá)異常從而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。
　　4.化橘紅醇提物對900Mhz損傷SD大鼠精子保護(hù)作用的研究<

8、br>　　空白組、空白灌胃組和偽輻照組各數(shù)據(jù)之間沒有顯著性差異，說明灌胃的方式、輻照箱以及灌食化橘紅醇提物對于SD大鼠的各項(xiàng)指標(biāo)均沒有影響。相對于輻照組SD大鼠來說，輻照灌胃組SD大鼠精子中各項(xiàng)指標(biāo)與其存在有顯著性差異并且和空白組不存在有顯著性差異。說明化橘紅醇提物能夠有效抵消因900MHz電磁輻照所帶來的氧化壓力所致的細(xì)胞凋亡，從而對SD大鼠精子起到保護(hù)作用。
　　5.化橘紅對900MHz電磁輻射損傷SD大鼠睪丸保護(hù)作用研究

9、r>　　本研究中組織切片、TUNEL、生理生化檢測、RT-qPCR的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示化橘紅醇提物能夠明顯減少因?yàn)?00MHz電磁輻照所引起的睪丸組織中活性氧濃度，從而減輕由此所引起的氧化損傷。RT-qCR結(jié)果顯示輻照灌胃組中bcl-2、Hsp90以及Akt的表達(dá)量相對于輻照組SD大鼠升高并恢復(fù)到空白組水平，而bax、cytochrome c、caspasae3、BAD表達(dá)量相對于輻照組SD大鼠降低并恢復(fù)到空白組水平。說明化橘紅能夠有效的通過