c-fes基因在白血病細(xì)胞中的表達(dá)及其臨床意義.pdf

1、目的：白血病是血液系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，有關(guān)白血病發(fā)生的確切機(jī)制尚未明確，目前最突出的是分化基因?qū)W說。該學(xué)說認(rèn)為分化基因突變可以阻止細(xì)胞的終末分化，使幼稚細(xì)胞堆積導(dǎo)致癌變。由于腫瘤細(xì)胞具有低分化、高增殖的特性，因此誘導(dǎo)分化可以使腫瘤從未分化狀態(tài)重新進(jìn)入分化軌道，為白血病的治療提供一個(gè)新思路。fes屬于src家族，c-fes最早由Snyder和Theilen于1969年從貓肉瘤病毒中分離出來。人類c-fes基因定位于染色體15q25-

2、26，編碼分子量為93kD的非受體型酪氨酸激酶（Fes），c-fes mRNA在初治AML、CML、某些惡性淋巴性疾病、造血干細(xì)胞、CD34+原始細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、中樞神經(jīng)系統(tǒng)及白血病細(xì)胞株如HL-60、KG-1、TF-1、 FHP-1和U937細(xì)胞中均有表達(dá)。由于造血干細(xì)胞和白血病細(xì)胞存在分化受阻，檢測(cè)到c-fes的表達(dá)水平較低。在分化的細(xì)胞中，c-fes mRNA的表達(dá)僅限于髓系，在成熟淋巴細(xì)胞中不表達(dá)。另外，隨著髓系細(xì)胞分化程度

3、的增加，c-fes mRNA表達(dá)水平、蛋白水平和激酶活性都會(huì)因?yàn)榱＜?xì)胞的分化作用而得以提高。不僅如此，c-fes還參與許多細(xì)胞分化信號(hào)傳導(dǎo)途徑。本試驗(yàn)旨在研究不同類型白血病細(xì)胞中c-fes mRNA的表達(dá)及其與臨床預(yù)后之間的關(guān)系。同時(shí)進(jìn)一步探討c-fes表達(dá)水平與白血病分型的關(guān)系及在髓系分化方面的作用，為臨床治療白血病提供幫助。
　　 方法：
　　 1.研究對(duì)象：121例急、慢性白血病患者，其中初治急性髓系白血?。╝cu

4、te myeloid leukemia，AML）66例，包括M14例、M226例（AML1/ETO融合基因陽性者8例）、M314例（PML/RARa融合基因陽性者9例）、M412例、M58例、M62例；急性淋巴細(xì)胞白血?。╝cute lymphoblastic leukemia，ALL）28例，其中L16例、L220例、L32例，慢性粒細(xì)胞白血?。╟hronic myelocytic leukemia，CML）23例，包括慢性期（CML

5、-CP）10例、加速期（CML-AP）6例、急變期（CML-BP）7例，慢性淋巴細(xì)胞白血?。–LL）患者4例。男性患者69例，女性患者52例。正常健康人20例作為對(duì)照。
　　 2.研究方法：采用實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（Real time-quantify reverse transcription polymerase chain reaction.RQ-PCR）方法對(duì)白血病患者的骨髓和20例正常對(duì)照的外周血進(jìn)行c-fes

6、 mRNA水平的檢測(cè)。通過細(xì)胞培養(yǎng)的方法對(duì)白血病細(xì)胞株HL-60進(jìn)行傳代培養(yǎng)，并用不同濃度的三氧化二砷（arsenic trioxide，As2O3）對(duì)其進(jìn)行處理，然后于鏡下觀察細(xì)胞增殖狀況；用MTT法觀察細(xì)胞活性及及生長狀況，并繪制生長曲線；應(yīng)用硝基四氮唑蘭（NBT）還原實(shí)驗(yàn)觀察HL-60細(xì)胞的分化情況；采用Wright-Giemsa染色觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化；用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞膜上的CD11b的表達(dá)情況；用RQ-PCR方法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組與

7、對(duì)照組c-fes基因的mRNA的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：
　　 1.實(shí)時(shí)定量PCR顯示，AML患者組c-fes mRNA的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組（P<0.001），ALL患者組c-fes mRNA的表達(dá)水平與對(duì)照組相比無明顯差異（P>0.05），AML患者組c-fes mRNA的表達(dá)水平明顯高于ALL患者組，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。說明c-fes基因在AML患者高表達(dá)，而在ALL患者中不表達(dá)或低水平表達(dá)，提

8、示c-fes基因在AML和ALL的鑒別方面可能存在一定的價(jià)值。
　　 2.CML-CP患者組c-fes mRNA的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組（P<0.01），CML-AP患者組c-fes mRNA的表達(dá)水平高于對(duì)照組（P<0.05），CML-BP患者組c-fes mRNA的表達(dá)水平與對(duì)照組相比無明顯差異（P>0.05），CML-CP患者組c-fes mRNA高于CML-AP患者組（P<0.05），CML-CP患者組c-fes mRN

9、A的表達(dá)水平明顯高于CML-BP患者組（P<0.01），CML-AP患者組c-fes mRNA的表達(dá)水平高于CML-BP患者組（P<0.05）。說明隨著疾病的進(jìn)展，髓系分化能力的下降，c-fes mRNA表達(dá)水平也逐漸下降甚至缺失，提示c-fes基因在髓系分化方面具有重要作用。
　　 3.c-fes mRNA表達(dá)水平高的患者較低表達(dá)的患者（非M3患者）化療后緩解率高，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。提示c-fes基因的表達(dá)水

10、平可為臨床預(yù)后的判斷提供幫助。
　　 4.低濃度（0.1、0.5、1.0、2.5μmol/L）.As2O3對(duì)HL-60細(xì)胞株具有明顯的誘導(dǎo)分化作用，并且存在一定的劑量依賴性和時(shí)間依賴性的量效關(guān)系
　　 5.經(jīng)低濃度（0.1、0.5、1.0、2.5μmol/L）As2O3作用后，HL-60細(xì)胞形態(tài)上趨于成熟分化，體積縮小，核仁不清或消失，核漿比例減小，核形變得不規(guī)則，呈現(xiàn)腎形、分葉狀等，胞質(zhì)內(nèi)空泡明顯增多。
　　

11、6.RQ-PCR.結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，各試驗(yàn)組細(xì)胞中c-fes mRNA的表達(dá)有不同程度的上調(diào)，并且表達(dá)強(qiáng)度與藥物濃度有劑量依賴關(guān)系。
　　 結(jié)論：
　　 1.c-fes基因在成人AML和部分CML患者中有異常高表達(dá)，而在ALL患者低表達(dá)或無表達(dá)，提示c-fes基因在白血病分型中有一定價(jià)值。
　　 2.AML患者中c-fes高表達(dá)者緩解率高，低表達(dá)者緩解率低。提示c-fes可作為判斷白血病臨床預(yù)后的的指標(biāo)之一

12、。
　　 3.CMIPCP患者組c-fes mRNA高于CML-AP患者組和CML-BP患者組，CML-AP患者組c-fes mRNA的表達(dá)水平高于CML-BP患者組。隨著疾病的進(jìn)展，髓系分化能力的下降，c-fes表達(dá)水平也逐漸下降甚至缺失，提示c-fes在細(xì)胞分化方面具有重要作用。
　　 4.As2O3對(duì)HL-60細(xì)胞具有明顯的誘導(dǎo)分化作用，并且呈現(xiàn)一定的劑量依賴性和時(shí)間依賴性的量效關(guān)系。
　　 5.As2O3