Id基因家族在白血病細胞中的表達及其臨床意義.pdf

1、目的：應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR)方法，檢測分化抑制因子(inhibitors of differentiation，Id)在健康志愿者、急性非淋巴細胞白血病、慢性粒細胞白血病白細胞中的表達情況，探討Id基因表達與急性非淋巴細胞和慢性粒細胞白血病發(fā)病的相關(guān)性，為白血病的診斷、治療提供參考。 方法：分別收集20例健康自愿者(

2、healthy volunteers，HV)新鮮外周靜脈血，16例急性菲淋巴細胞白血病(acute non-lymphocytic leukemia,ANLL)和10例慢性粒細胞白血病(chronic myelocytic leukemia,CML)新鮮外周靜脈血，采用密度梯凄離心法分離白細脆，分別加入乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝，3％ Dextron T-500沉淀紅細胞，小心混勻后靜置30min，磷酸鹽緩沖液(Phosphate-b

3、uffered saline PBS)充分混勻洗滌2次，采用密度梯度離心法離心，棄上清液加入紅細胞裂解液充分裂解紅細胞，離心，棄上清液加入PBS洗滌2次，棄上清液收集外周血白細胞。Trizol試劑提取各組樣本白細胞總RNA。經(jīng)紫外分光光度計檢測OD260/OD280的比值及各組樣本外周血白細胞總RNA的含量，計算出各組的RNA的濃度與純度。用1.5％的甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳檢測健康自愿者、急性非淋巴細胞白血病患者、慢性粒細胞白血病患者外

4、周血自細胞總RNA分子的完整性。 利用逆轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物將總RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，然后應(yīng)用Primer 5.0引物設(shè)計軟件設(shè)計的Id基因各亞型(Id1，Id2，Id3，Id4)的特異引物進行體外擴增。以β-action基因作為內(nèi)參照進行標(biāo)準(zhǔn)化，應(yīng)用SPSS 14.0統(tǒng)計分析軟件，統(tǒng)計并分析各組樣本在相同標(biāo)準(zhǔn)化條件下DNA擴增產(chǎn)物是否存在差異。 結(jié)果； ①RT-PCR分別擴增健康自愿者、急健非淋巴細胞白血病患者、

5、慢性粒細胞白血病患者中Id1，Id2，Id3，Id4四種目的基因和內(nèi)參對照β-action基因的cDNA產(chǎn)物，與DNA分子Marker相比較顯示擴增產(chǎn)物大小分別為494bp，354bp，170bp，170bp和527bp，與預(yù)期理論值大小一致。 ②將Id1，Id2，Id3和Id4四種目的基因與內(nèi)參照β-action基因的比值，分別在健康自愿者、急性非淋巴細胞自血病患者、慢性粒細胞自血病患者組中半定量表達的情況經(jīng)過單因素方差分析和

6、SPSS 14.0統(tǒng)計分析結(jié)果顯示，四種Id基因亞型在健康自愿者和急性非游巴細胞白血病患者、慢性粒細胞白血病患者白細胞中的表達各不相同。Id1基因在健康自愿者外周血自細胞中表達較高，但在急性非淋巴細胞白血瘸患者、慢性粒細胞白血病患者外周血白細胞中表達降低(P<0.001，P<0.042)。Id2基因在健康自愿者外周血白細胞中表達較低，但在急性非淋巴細胞白血病患者、慢性粒細胞白血病患者外周血白細胞中表達增高(P<0.01，P<0.039)

7、。Id3基因在健康自愿者外周血自細胞中表達較高，但在急性非淋巴細胞白血病患者和慢性粒細胞白血瘸患者外周血白細胞中表達降低(P<0.002,P<0.046)。Id4基因在健康自愿者外周血白細胞中表達較高，但在急性非淋巴白血病患者和慢性粒細胞白血病患者外周血白細胞中表達降低(P<0.011，P<0.025)。 結(jié)論：Id基因四種亞型Id1，Id2，Id3和Id4，分別在正常人、急性非淋巴細胞白血病患者和慢性粒細胞白血病患者外周血白細