食管癌干細胞的分離與鑒定.pdf

1、目的：研究篩選食管癌干細胞的方法。
　　 方法：采用熒光免疫細胞化學方法和流式細胞儀檢測TE-1細胞和抗砷細胞中CD44、CD133、P75NTR、Oct-4四種標志物在的表達和定位及其細胞周期；不同濃度的As2O3（0，0.5，1，2，4，8，和16μmol/L）作用不同時間（24h、48h和72h）后，采用MTT法檢測As2O3對TE-1食管癌細胞的毒性。As2O3（0，2，4和8μmol/L）作用TE-1細胞不同時間（24

2、h、48h和72h）后，采用AnnexinV/PI雙染色法流式細胞儀檢測各組細胞凋亡率。根據(jù)MTT結(jié)果選擇8μmol/L As2O3作用匯合達80%以上的TE-1細胞12d后，TE-1細胞獲得抗砷性。
　　 結(jié)果：（1）食管癌TE-1細胞中CD44、CD133、P75NTR、Oct-4的均陽性表達，其中CD44、CD133熒光定位細胞的胞漿，而P75NTR核陽性率為44.29%，Oct-4核陽性率為51.34%。（2）當As2O

3、3濃度大于1μmol/L時抑制細胞增殖，細胞增殖抑制率呈濃度和時間依賴性。（3）As2O3對細胞凋亡的影響呈濃度和時間依賴性，凋亡率隨As2O3濃度的增加及作用時間的延長而升高。當As2O3濃度大于4μmol/L時促進細胞凋亡（p<0.05）。（4）8μmol/L As2O3與TE-1細胞培養(yǎng)48h時，TE-1細胞島周圍出現(xiàn)了折光性強的細胞形成一道保護屏障，維持24h后消失，形成一層膜狀結(jié)構(gòu)。此后折光性強的細胞屏障兩天一個周期交替出現(xiàn)和

4、消失。培養(yǎng)12天后，約50%的細胞存活下來。撤砷后，細胞島周圍細胞變得疏松，厚的膜狀結(jié)構(gòu)消失，細胞島之間的腔隙被新的細胞填補。（5）撤砷后細胞的G0/G1期細胞明顯比TE-1細胞的G0/G1期細胞減少（P<0.01），而S期細胞明顯增多（P<0.01）。（6）撤砷后細胞四種抗體均全部表達，但是P75NTR、Oct-4核陽性細胞顯著減少。
　　 結(jié)論：（1）P75NTR、Oct-4、 CD44和CD133不是食管癌干細胞的特異性標