膀胱癌干細胞分離、鑒定與基因修復實驗研究.pdf

1、目的：
　　 “腫瘤干細胞學說”認為腫瘤組織中存在的腫瘤干細胞是腫瘤發(fā)生、發(fā)展的主要原因。腫瘤干細胞（Cancer stem cell，CSC）的提出為基因靶向治療找到了靶細胞。幾種人類腫瘤干細胞已經被成功分離鑒定，但膀胱癌干細胞仍未被分離鑒定。本實驗在前期工作成果的基礎上，依據(jù)暢繼武教授的“兩類癌”理念和30余年的相關研究，進一步驗證膀胱癌干細胞亞群起始和維持腫瘤的能力，并且對膀胱癌干細胞相關基因Bmi-1進行初步的基因修復探

2、討，為最終分離鑒定膀胱癌干細胞和膀胱癌基因靶向治療打下實驗基礎。
　　 方法：
　　 利用免疫磁珠分選技術，分選EMA-CD44v6+亞群細胞，進行該亞群細胞的裸鼠荷瘤實驗；通過成瘤細胞傳代培養(yǎng)和成瘤標本病理學實驗，分析該亞群細胞起始和維持腫瘤的能力。
　　 利用醫(yī)學生物學技術，對膀胱癌干細胞相關基因Bmi-1進行基因信息分析，發(fā)現(xiàn)Bmi-1有意義的基因突變；利用RDO基因修復工具，對Bmi-1基因突變進行原位修

3、復；通過基因修復后EMA-CD44v6+亞群細胞的裸鼠荷瘤實驗，初步評估基因修復效果。
　　 結果：
　　 將EMA-CD44v6+亞群細胞最小致瘤劑量降至5.0×103個，病理學實驗支持該亞群細胞的腫瘤干細胞特性；Bmi-1基因第6個外顯子上985bp處G-A點突變是有意義的基因突變；修復后EMA-CD44v6+亞群細胞最小致瘤劑量為1.0×104個，病理學實驗證實基因修復使得該亞群成瘤能力有所減弱。
　　 結