動脈灌注VM-26對鼠腦膠質(zhì)瘤治療作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的：膠質(zhì)瘤是神經(jīng)系統(tǒng)危害最大的一類腫瘤，它呈浸潤性生長，手術(shù)難以根治，目前多采用以手術(shù)為主，結(jié)合放療、化療的綜合治療?；熕幬锒嗖捎玫头肿?，脂溶性高，易透過血腦屏障的藥物如鬼臼毒類衍生物來治療。本實(shí)驗(yàn)采用衛(wèi)盟(VM-26)對大鼠腦膠質(zhì)瘤進(jìn)行治療，此藥物是鬼臼毒的半合成衍生物，是常用的膠質(zhì)瘤化療藥物，抗瘤譜廣，具有高度脂溶性，能通過血腦屏障，破壞脫氧核糖核酸，主要作用于DNA拓樸異構(gòu)酶Ⅱ，導(dǎo)致雙鏈或單鏈破壞；阻斷腫瘤細(xì)胞分裂增殖的途徑，

2、抑制增殖期腫瘤細(xì)胞的增殖，此外還能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生凋亡。給藥途徑上分為動脈灌注及靜脈輸入兩種途徑。靜脈途徑化療在臨床上具有應(yīng)用廣泛，操作簡單方便、價格低廉等優(yōu)點(diǎn)，其治療效果已得到臨床上的證實(shí)，但由于其通過體循環(huán)進(jìn)入腫瘤組織，透過血腦屏障能力差，全身毒副作用大，無法進(jìn)一步提高腫瘤組織的血藥濃度，成為提高其療效的瓶頸。而動脈化療由于選擇腫瘤組織的供血動脈進(jìn)行灌注，提高了藥物對腫瘤治療的針對性以及腫瘤組織內(nèi)部的血藥濃度，增加化療藥物的利用度

3、，此外，還可減少對身體非靶器官的毒副作用。本實(shí)驗(yàn)通過兩種不同途徑給予化療藥物VM-26，分別觀察大鼠腦膠質(zhì)瘤腫瘤體積的變化以及生存期的不同，以及腫瘤細(xì)胞核增值抗原(PCNA)，拓?fù)洚悩?gòu)酶-Ⅱ(topo Ⅱ)和凋亡情況的變化，從而從整體上來觀察藥物的治療效果，研究藥物作用機(jī)制；觀察動脈灌注途徑的化療效果，為臨床應(yīng)用提供理論指導(dǎo)。 方法：培養(yǎng)9L大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞，細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，取對數(shù)生長期細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞數(shù)量為10<'6>～10

4、<'7>，利用微量加樣器于右側(cè)尾狀核附近接種于大鼠顱內(nèi)，10天后行MRI檢查，確認(rèn)成瘤后，將24只大鼠隨機(jī)分為三組，每組8只，分別通過大鼠鼠尾靜脈(靜脈組)及頸動脈(動脈組)給予化療藥物VM-26，另設(shè)生理鹽水對照組，各組大鼠化療前半小時靜點(diǎn)甘露醇開放血腦屏障，在大體上觀察各組大鼠腫瘤體積大小變化以及生存期的不同；在給予不同途徑治療后一周，處死大鼠，在接種部位取材后，在蛋白及分子水平上觀察腫瘤細(xì)胞的增殖及凋亡情況，采用PCR技術(shù)觀察腫瘤

5、細(xì)胞PCNA及topo Ⅱ的變化；流式細(xì)胞技術(shù)觀察腫瘤細(xì)胞PCNA、topo Ⅱ以及凋亡的變化情況；免疫組化方法觀察腫瘤細(xì)胞PCNA的變化情況。 結(jié)果： 1、各組大鼠生存期平均為：動脈組為27天，最長為31天；靜脈組為25天，最長為27天；對照組為21天，最長為26天。 2、MRI掃描結(jié)果：動脈組大鼠經(jīng)治療后腫瘤生長速度最慢，靜脈組其次，對照組最快。結(jié)果經(jīng)q檢驗(yàn)，P<0.05，差異有顯著性。 3、PCR

6、檢測結(jié)果：動脈組和靜脈組PCNA及topo Ⅱ表達(dá)低于對照組，動脈組兩者表達(dá)同時也低于靜脈組，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，采用q檢驗(yàn)，P<0.05，差異有顯著性。 4、流式細(xì)胞技術(shù)觀察結(jié)果：動脈組PCNA及topoⅡ表達(dá)最低，靜脈組其次，對照組最高，動脈組腫瘤細(xì)胞凋亡率最高，靜脈組其次，對照組最低，結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計軟件分析，采用q檢驗(yàn)，P<0.05，差異有顯著性。 5、免疫組化方法檢測PCNA表達(dá)結(jié)果：動脈組表達(dá)最低，靜脈組其次，兩者又明顯

7、低于對照組的表達(dá)，經(jīng)統(tǒng)計軟件分析，采用q檢驗(yàn)，P<0.05，結(jié)果有顯著差異。 結(jié)論： 1、成瘤大鼠經(jīng)治療后，PCNA表達(dá)減少，腫瘤細(xì)胞增殖速度減慢，腫瘤生長受到抑制。 2、治療后腫瘤細(xì)胞topo Ⅱ表達(dá)減少，可有效阻斷細(xì)胞分裂生長，對腫瘤細(xì)胞增殖分裂具有抑制作用。 3、兩組治療組大鼠經(jīng)治療后腫瘤細(xì)胞凋亡明顯增多，可見藥物可導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞凋亡，對于控制腫瘤生長具有重要作用。 4、動脈組大鼠腫瘤細(xì)胞增殖