基于TACI和BAFF結(jié)構(gòu)的BAFF拮抗肽的研究.pdf

1、B細胞活化因子（BAFF），是1999年發(fā)現(xiàn)的腫瘤壞死因子配體超家族的成員，BAFF能夠促進B細胞增殖、分化和成熟，并能維持B細胞的生理功能，在體液免疫反應(yīng)中發(fā)揮著非常重要的作用。正常生理條件下，BAFF通過與三個已知受體——TACI、BCMA和BR3的特異性結(jié)合，可調(diào)節(jié)B細胞功能和維持機體免疫平衡。而BAFF的缺乏會導致機體免疫功能低下，引起免疫缺陷病；BAFF的過量表達則會誘發(fā)B細胞介導的自身免疫和B細胞惡性增殖，引起多種疾病如系統(tǒng)

2、性紅斑狼瘡（SLE）、類風濕性關(guān)節(jié)炎（RA）、干燥綜合征（SS）和B淋巴細胞瘤。對于免疫缺陷病，可以采取補充BAFF的方法來進行治療；而對于自身免疫病和B淋巴細胞瘤，則需要以BAFF或B細胞為靶點來進行其功能的抑制而實現(xiàn)治療。目前，以BAFF為靶點來抑制BAFF功能的研究主要包括抗BAFF單克隆抗體、BAFF的可溶性受體和抑制性短肽，其中，基于BCMA和BR3結(jié)構(gòu)的拮抗肽已經(jīng)被證明具有一定的抑制BAFF與相應(yīng)受體結(jié)合的作用。本課題是研究

3、以TACI和BAFF的3D結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)而設(shè)計和合成得到拮抗肽，通過體外實驗，初步證明了以TACI型短肽作為治療手段具有一定的可行性。具體研究結(jié)果如下：
　?。?）以pET-30a-BAFF1為基礎(chǔ)，利用不同的內(nèi)切酶和引物，構(gòu)建得到一個新的重組表達載體——pET-30a-BAFF2，在相同的誘導表達和純化條件下，獲得可溶性的BAFF1、BAFF2蛋白。
　?。?）采用間接法ELISA，以BAFF作為抗原，TACI-Fc作為一抗，

4、證明了純化得到的BAFF1和BAFF2都具有生物學活性，都能與TACI-Fc在體外發(fā)生顯著的特異性結(jié)合，而且BAFF2比BAFF1呈現(xiàn)出更強的結(jié)合活性，TACI-Fc與BAFF2結(jié)合的飽和濃度約為10μg/mL。
　　（3）利用設(shè)計和合成得到的兩種基于TACI關(guān)鍵氨基酸殘基的拮抗肽——TA和TC，來進行競爭性ELISA，證明了TA、TC具有特異性抑制BAFF2與TACI-Fc結(jié)合的作用；與無關(guān)肽NRP維持7％的抑制率相比，拮抗肽T