FucT-Ⅶ上調內(nèi)皮細胞中粘蛋白endomucin糖基化影響單核細胞對其粘附機制研究.pdf

1、血管內(nèi)皮細胞是連續(xù)覆蓋在全身血管內(nèi)膜的一層細胞群，研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮層不僅僅是血液和組織的屏障，還具有其他多種功能，鑒于這些生理功能，血管內(nèi)皮細胞的損傷是諸如動脈粥樣硬化、高血壓、糖尿病等的始動環(huán)節(jié)。中內(nèi)皮細胞與單核細胞的粘附這一過程涉及單核-內(nèi)皮細胞諸多粘附分子，不僅與細胞表面的粘附分子表達量有關，同時可能與相關因子的翻譯后修飾（如糖基化）有關，因此探討內(nèi)皮細胞膜上功能蛋白的糖基化與功能的關系對揭示內(nèi)皮-單核細胞相互作用機制起著至關重要的作

2、用。
　　唾液酸化的路易斯酸X(sialyl-Lewis X，sLex)是一種巖藻糖基化產(chǎn)物，參與機體的一些疾病發(fā)生過程中，其中炎癥反應中sLex與選擇素的粘附作用是關鍵步驟。sLex糖支鏈是唾液酸化蛋白合成的最后一步，是在巖藻糖基轉移酶家族(FucT)的催化作用下，將巖藻糖以α1，3-糖苷鍵的形式連接到N-乙酰葡萄糖胺上形成，根據(jù)細胞類型的不同，F(xiàn)ucT家族可能為FucT-Ⅲ，Ⅳ，Ⅴ，Ⅵ及Ⅶ等。細胞表面粘蛋白endomucin的

3、糖鏈部分在內(nèi)皮細胞與單核細胞粘附過程中發(fā)揮重要作用。在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)FucT-Ⅶ及其催化產(chǎn)物sLex與炎癥反應有關:通過細胞粘附實驗，我們觀察到IL-1β處理細胞后內(nèi)皮細胞與單核細胞粘附能力增強;qRT-PCR及western blot方法檢測到在IL-1β誘導的炎癥模型中FucT-Ⅶ及其催化產(chǎn)物sLex表達量均相應上調。采用FucT-Ⅶ基因干擾及過表達質粒轉染EA.hy926細胞，結果表明FucT-Ⅶ的表達量與細胞粘附能力呈正相關

4、，與炎癥因子處理的結果相似。同時還發(fā)現(xiàn)FucT-Ⅶ干擾可阻滯內(nèi)皮細胞中IL-1β誘導的FucT-Ⅶ及sLex蛋白量上調，而且降低了IL-1β誘導的細胞粘附能力的增強。通過特異性抗體封閉粘蛋白endomucin及sLex，可以抑制由于FucT-Ⅶ過表達質粒轉染細胞所增強的內(nèi)皮細胞的粘附能力。western blot方法檢測到IL-1β處理或FucT-Ⅶ過表達質粒轉染細胞增加endomucin表面sLex糖鏈修飾，但并不影響內(nèi)皮細胞內(nèi)end

5、omucin蛋白表達。在相關的信號通路研究中，我們發(fā)現(xiàn)與單獨給予IL-1β處理組相比，SB203580及PD98059顯著阻滯IL-1β處理所致的FucT-Ⅶ表達量上調，而且減少了炎癥因子IL-1β誘導的內(nèi)皮細胞-單核細胞粘附能力增強?；谏鲜鰧嶒灲Y果，我們推斷P38-ERK信號通路可能通過調控FucT-Ⅶ表達從而影響endomucin粘蛋白介導的內(nèi)皮細胞-單核細胞粘附。綜上所述，本研究首次初步闡明粘蛋白endomucin通過FucT-