糖基化終產(chǎn)物對(duì)人血管內(nèi)皮細(xì)胞VCAM-1表達(dá)和粘附功能的影響及其機(jī)制.pdf

1、目的:探討糖基化終產(chǎn)物(AGEs)對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)VCAM-1的表達(dá)和對(duì)HUVECs與人單核細(xì)胞(PBMCs)粘附率的影響,觀察蛋白激酶C(PKC)抑制劑(STS)及絲裂酶原激活的蛋白激酶(MAPK)抑制劑(PD98059)對(duì)上述效應(yīng)的干預(yù)作用,并研究HUVECs受AGEs刺激后,其PKC活性的變化,從而探討AGEs對(duì)人血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附功能的影響及其可能的機(jī)制.方法:以D-葡萄糖和牛血清白蛋白(BSA)在體外37℃條件

2、下孵育制備AGEs.用膠原酶消化法分離HUVECs并加以培養(yǎng)、傳代.以AGEs、AGEs加STS和AGEs加PD98059干預(yù)HUVECs,采用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)測(cè)定HUVECs表面VCAM-1的表達(dá)水平.用密度梯度加粘附法分離人外周血單核細(xì)胞(PBMCs),按Esposito's法進(jìn)行HUVECs-PBMCs粘附試驗(yàn),并根據(jù)Chen氏法計(jì)算HUVECs-PBMCs的粘附率.采用同位素[γ-32P]ATP液閃計(jì)數(shù)技術(shù)測(cè)定受AGEs干預(yù)

3、后HUVECs PKC活性的變化.結(jié)果:在基礎(chǔ)狀態(tài)下,HUVECs有一定量的VCAM-1表達(dá).VCAM-1的表達(dá)水平隨AGEs濃度的增大,逐漸升高(P<0.01).在時(shí)-效關(guān)系上,AGEs與HUVECs孵育3h后,VCAM-1表達(dá)開始升高(P0.05),6h達(dá)到高峰(P<0.01),后逐漸下降,24h回至基礎(chǔ)水平.HUVECs-PBMCs粘附率的變化與VCAM-1的表達(dá)水平呈高度平行關(guān)系.蛋白激酶C(PKC)抑制劑(STS)可明顯降低由

4、AGEs所導(dǎo)致的VCAM-1表達(dá)增加以及HUVECs-PBMCs粘附率的增加(P<0.01).絲裂酶原激活的蛋白激酶(MAPK)抑制劑(PD98059)對(duì)上述效應(yīng)無明顯影響.AGEs與HUVECs孵育10min后,PKC活性明顯升高(P<0.01),15 min達(dá)到高峰(P<0.001),20min后逐漸下降,60min回至基礎(chǔ)水平.PKC的活性隨AGEs濃度的增大而升高(P<0.05~0.01).結(jié)論:AGEs可增加HUVECs VC