血脂康對(duì)胰島素、血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞VCAM-1、ICAM-1表達(dá)的影響.pdf

1、目的:
　　 用胰島素(insulin)、血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)、血脂康體外刺激培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),通過觀察細(xì)胞形態(tài)、增殖能力,粘附分子VCAM-1、ICAM-1 mRNA及蛋白表達(dá)水平,探討胰島素、AngⅡ的促進(jìn)AS作用機(jī)制和血脂康的抑制AS作用及可能的作用機(jī)制。
　　 方法:
　　 在體外培養(yǎng)HUVECs,2～3

2、代用于實(shí)驗(yàn)。分成八組:正常對(duì)照組、血脂康組(150μg/ml)、胰島素組(100nmol/ml)、AngⅡ組(5×10-8mol/ml)、AngⅡ+胰島素組、胰島素+血脂康組、AngⅡ+血脂康組、AngⅡ+胰島素+血脂康組。血脂康各組,預(yù)先用血脂康孵育2h,然后加AngⅡ或/和胰島素共同孵育。①通過顯微鏡及MTT比色法觀察藥物對(duì)HUVECs作用24、48、72h細(xì)胞形態(tài)學(xué)、增殖能力的影響；②通過半定量RT-PCR和Wester-blot

3、檢測(cè)刺激培養(yǎng)24h HUVECsICAM-1、VCAM-1 mRNA和蛋白表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:
　　 ①外源性加入血脂康后分別作用24、48、72h,同對(duì)照組相比,細(xì)胞形態(tài)和活性無明顯變化,說明血脂康藥物本身對(duì)細(xì)胞沒有毒性。而胰島素、AngⅡ作用于細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮細(xì)胞貼壁時(shí)間延遲,部分細(xì)胞與周圍細(xì)胞脫離接觸,細(xì)胞胞體縮窄變長(zhǎng),細(xì)胞質(zhì)密度增加,核質(zhì)濃縮,細(xì)胞數(shù)量減少,尤其胰島素+AngⅡ組。說明胰島素、AngⅡ?qū)?xì)胞有毒

4、性,且兩者具有協(xié)同作用。
　　 ②與對(duì)照組相比,胰島素、AngⅡ刺激24h后內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1、VCAM-1mRNA和蛋白的表達(dá)顯著升高(P<0.05),且胰島素+AngⅡ組ICAM-1、VCAM-1mRNA和蛋白水平顯著高于胰島素或AngⅡ單獨(dú)刺激組(P<0.05),提示胰島素和AngⅡ誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1、VCAM-1 mRNA和蛋白的表達(dá)且有協(xié)同作用,而胰島素+血脂康、AngⅡ+血脂康、胰島素+AngⅡ+血脂康與對(duì)應(yīng)

5、未加血脂康各組相比,內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1、VCAM-1 mRNA和蛋白的表達(dá)明顯降低(P<0.05),提示血脂康在一定程度上有抑制胰島素、AngⅡ誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1、VCAM-1mRNA和蛋白的表達(dá),而單用血脂康組與對(duì)照組相比,ICAM-1、VCAM-1 mRNA和蛋白水平無明顯改變(P>0.05),表明血脂康對(duì)正常內(nèi)皮細(xì)胞無明顯影響。
　　 結(jié)論:
　　 胰島素、血管緊張素Ⅱ能導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變,增殖能力降低,促