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文檔簡介
1、目的:
動(dòng)脈粥樣硬化( atherosclerosis,AS)是最常見的循環(huán)系統(tǒng)疾病之一,也是最常見的危害人類健康的疾病之一,主要特征為血管壁內(nèi)皮細(xì)胞受到損傷導(dǎo)致脂質(zhì)堆積、趨化炎癥細(xì)胞聚集。其中氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)是重要的危險(xiǎn)因子之一,在內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙或受到損傷時(shí)ox-LDL可與其表面上的特異性受體血凝素樣氧化低密度脂蛋白受體(lectin-lik
2、e oxidized low-density lipoprotein receptor-1,LOX-1)相結(jié)合,誘導(dǎo)泡沫細(xì)胞的形成,從而啟動(dòng)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成與發(fā)展。在這個(gè)過程中,血管細(xì)胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1, VCAM-1)、細(xì)胞間黏附分子-1( intercellularcell adhesion molecule-1, ICAM-1)是很重要的兩種黏附分子,它們參與多
3、種病理、生理過程,會(huì)引起內(nèi)皮細(xì)胞抗凝和抗黏附功能失調(diào),從而加速 AS形成。Ang-(1-7)是新的腎素-血管緊張素系統(tǒng)成員之一,具有擴(kuò)管、抗增殖,對(duì)心血管系統(tǒng)有著多方面的保護(hù)和調(diào)節(jié)作用。本研究擬在體外培養(yǎng)大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞(SVAREC),通過不同濃度 ox-LDL誘導(dǎo)和在ox-LDL基礎(chǔ)上加入Ang-(1-7)誘導(dǎo),觀察內(nèi)皮細(xì)胞前后增殖情況及LOX-1、VCAM-1、ICAM-1轉(zhuǎn)錄水平的動(dòng)態(tài)改變及Ang-(1-7)保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞的可能
4、機(jī)制。為更深入理解AS形成的分子機(jī)制以及尋找抗 AS藥物潛在的分子靶點(diǎn)。
方法:
1.實(shí)驗(yàn)用Cell Counting Kit(CCK-8)檢測經(jīng)ox-LDL組和ox-LDL+Ang-(1-7)組處理后SVAREC細(xì)胞的增殖情況。
2.實(shí)驗(yàn)用熒光實(shí)時(shí)定量聚合酶反應(yīng)(RT-PCR)法檢測經(jīng)過 ox-LDL組和ox-LDL+Ang-(1-7)組處理后的SVAREC細(xì)胞LOX-1、VCAM-1、ICAM-1mRN
5、A的表達(dá)水平。
結(jié)果:
1.用Cell Counting Kit(CCK-8)檢測結(jié)果顯示:①ox-LDL組:加入不同濃度的ox-LDL(加入濃度為10mg/L、20mg/L、50mg/L、100mg/L)和SVAREC細(xì)胞分組培養(yǎng)24h,發(fā)現(xiàn)其明顯抑制SVAREC細(xì)胞的生長增殖。在0-100mg/L的濃度范圍內(nèi),隨ox-LDL藥物濃度增加,ox-LDL實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞增殖抑制率逐漸升高,并呈現(xiàn)劑量依賴性關(guān)系,與同時(shí)間對(duì)
6、照組相比較,它們之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。②ox-LDL+Ang-(1-7)組:實(shí)驗(yàn)組在加入終濃度為100mg/L的ox-LDL試劑的基礎(chǔ)上,再分別加入Ang-(1-7)濃度為10-9mol/L、10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L和SVAREC細(xì)胞分組培養(yǎng)24h后,隨著Ang-(1-7)濃度的升高,該組SVAREC細(xì)胞的生長抑制率逐漸降低,并呈現(xiàn)劑量依賴性,與同時(shí)間對(duì)照組相比較,它們之間的差異有統(tǒng)計(jì)
7、學(xué)意義(P<0.05)。
2.實(shí)驗(yàn)用RT-PCR法檢測結(jié)果顯示:①ox-LDL組:加入不同濃度的ox-LDL(加入濃度為10mg/L、20mg/L、50mg/L、100mg/L)和SVAREC細(xì)胞分組培養(yǎng)24h后。在0-100mg/L的濃度范圍內(nèi),隨著 ox-LDL的濃度升高, LOX-1、VCAM-1、ICAM-1mRNA的表達(dá)水平升高,與同時(shí)間對(duì)照組相比較,它們之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。②ox-LDL+Ang
8、-(1-7)組:實(shí)驗(yàn)組在加入終濃度為100mg/L的ox-LDL試劑的基礎(chǔ)上,再分別加入Ang-(1-7)濃度為10-9mol/L、10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L和SVAREC細(xì)胞分組培養(yǎng)24h后,隨著Ang-(1-7)濃度的升高,隨著Ang-(1-7)的濃度升高,LOX-1、VCAM-1、ICAM-1mRNA的表達(dá)水平明顯降低,與同時(shí)間對(duì)照組相比較,它們之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
結(jié)
9、論:
1.ox-LDL能有效抑制SVAREC細(xì)胞生長,而Ang-(1-7)能逆轉(zhuǎn)ox-LDL所致的細(xì)胞生長抑制。
2.ox-LDL能使LOX-1、VCAM-1、ICAM-1mRNA的表達(dá)水平升高呈劑量依賴性, Ang-(1-7)使LOX-1、VCAM-1、ICAM-1mRNA的表達(dá)水平降低并呈劑量依賴性,提示在內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙或損傷時(shí), ox-LDL可與其內(nèi)皮細(xì)胞表面的特異性受體LOX-1相結(jié)合,促進(jìn)黏附分子ICAM
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