腹脂素對血管內皮細胞ICAM-1和單核細胞MCP-1以及CD36表達的影響.pdf

1、第一章腹脂素對內皮細胞ICAM-1表達的影響 背景：腹脂素是一種新發(fā)現的脂肪細胞因子，在肥胖、糖尿病以及高血壓患者體內有顯著升高。體外實驗發(fā)現腹脂素能促進單核細胞、脂肪細胞等多種細胞分泌TNF-a、IL-1β和IL-6等炎癥因子；腹脂素也能促進單核細胞表達ICAM-1和促進內皮細胞表達VEGF。而脂肪細胞和單核細胞也能分泌表達腹脂素。腹脂素在頸動脈粥樣硬化斑塊和冠脈斑塊上表達豐富，且有缺血性癥狀者的腹脂素水平高于無癥狀者，這些提

2、示腹脂素很可能和動脈粥樣硬化病變發(fā)展有關。腹脂素能通過激活內皮ERK(1/2)信號途徑促進細胞表達VEGF,而既往有研究發(fā)現激活內皮細胞ERK(1/2)能促進粘附分子ICAM-1的表達。內皮細胞ICAM-1表達增加會促進單核細胞粘附于內皮加速動脈粥樣硬化進展。我們推測腹脂素可能通過激活內皮細胞的ERK(1/2)信號通路促進粘附分子ICAM-1的表達而影響動脈粥樣硬化病變的進展。 目的：觀察腹脂素單獨或者協(xié)同ox-LDL、葡萄糖對

3、內皮細胞表達ICAM-1以及對內皮-單核細胞粘附的影響。 方法：采用HUVEC內皮細胞株傳代3-6代時處于對數生長期的細胞作為研究對象。通過檢測細胞ICAM-1mRNA和蛋白表達變化來觀察腹脂素、腹脂素+ox-LDL或者腹脂素+葡萄糖對內皮細胞ICAM-1表達的影響，以及ERK(1/2)信號途徑在腹脂素影響內皮細胞表達ICAM-1中的作用。 結果： 1.腹脂素能促進內皮細胞表達ICAM-1，且其水平越高(觀察濃度

4、100ng/ml～800ng/ml)，刺激內皮細胞表達ICAM-1的作用越強，腹脂素也促進了細胞ERK(1/2)的表達，ERK(1/2)抑制劑PD98059能顯著抑制ICAM-1的表達。 2.腹脂素和ox-LDL有協(xié)同刺激內皮細胞表達ICAM-1的作用，且腹脂素水平越高(觀察濃度100ng/ml～800ng/ml)，協(xié)同刺激內皮細胞表達ICAM-1的作用越強，腹脂素和ox-LDL也促進了細胞EPK(1/2)的表達，ERR(1/2

5、)抑制劑PD98059能顯著抑制ICAM-1的表達。 3.腹脂素和葡萄糖有協(xié)同刺激內皮細胞表達ICAM-1的作用，且腹脂素水平越高(觀察濃度100ng/ml～800ng/ml)，協(xié)同刺激內皮細胞表達ICAM-1的作用越強，腹脂素和高糖也促進了細胞ERIC(1/2)的表達，ERK(1/2)抑制劑PD98059能顯著抑制ICAM-1的表達。 4.腹脂素促進內皮細胞表達ICAM-1的同時，也增強了單核細胞和內皮細胞的粘附能力。

6、 結論：腹脂素有促進內皮細胞表達ICAM-1的作用，在ox-LDL或者葡萄糖促進內皮細胞表達ICAM-1的基礎上腹脂素能進一步促進ICAM-1表達，腹脂素促進內皮細胞表達ICAM-1和其激活細胞ERK(1/2)信號通路有關。腹脂素促進細胞ICAM-1表達增加的同時也促進了單核細胞和內皮細胞的粘附。 第二章腹脂素對單核細胞MCP-1表達的影響 背景：在動脈粥樣硬化病變的發(fā)展過程中，單核細胞表達MCP-1增加及隨后的

7、單核細胞向內皮下趨化遷移增多是促進動脈粥樣硬化發(fā)展的重要因素。腹脂素是一種新發(fā)現的脂肪細胞因子，在和動脈粥樣硬化病變密切相關的肥胖、糖尿病以及高血壓患者體內有顯著升高。已有研究發(fā)現腹脂素有促進單核細胞表達ICAM-1、內皮細胞表達VEGF的作用。腹脂素在頸動脈動脈粥樣硬化斑塊和冠脈斑塊上有顯著表達，且有癥狀的頸動脈粥樣硬化患者腹脂素水平顯著高于無癥狀者，這些提示腹脂素很可能和動脈粥樣硬化 病變發(fā)展有關。單核細胞MCP-1的表達能促進粘

8、附于內皮細胞上的單核細胞向內皮下趨化遷移，腹脂素對單核細胞趨化因子MCP-1表達的影響尚無研究。 目的：觀察腹脂素單獨或者協(xié)同ox-LDL、葡萄糖對單核細胞表達MCP-1的影響，以及p38MAPK信號通道在腹脂素影響MCP-1表達中的作用。 方法：采用THP-1單核細胞株傳代3-6代時處于對數生長期的細胞作為研究對象。通過檢測細胞MCP-1mRNA和蛋白來觀察腹脂素、腹脂素+ox-LDL或者腹脂素+葡萄糖對單核細胞MCP

9、-1表達的影響，以及p38 MAPK信號途徑在腹脂素影響單核細胞表達MCP-1中的作用。結果 1.腹脂素能促進單核細胞表達MCP-1，且其水平越高(觀察濃度100ng/ml～800ng/ml)，刺激單核細胞表達MCP-1的作用越強，p38抑制劑SB202190能顯著抑制腹脂素促進單核細胞表達MCP-1的作用。 2.腹脂素+ox-LDL有協(xié)同刺激單核細胞表達MCP-1的作用，腹脂素水平越高，其協(xié)同刺激單核細胞表達

10、MCP-1的作用越強，p38抑制劑SB202190能顯著抑制腹脂素促進單核細胞表達MCP-1的作用。 3.腹脂素+葡萄糖有協(xié)同刺激單核細胞表達MCP-1的作用，腹脂素水平越高，其協(xié)同刺激單核細胞表達MCP-1的作用越強，p38抑制劑SB202190能顯著抑制腹脂素促進單核細胞表達MCP-1的作用。 結論：腹脂素有促進單核細胞表達MCP-1的作用，在ox-LDL或者葡萄糖促進單核細胞表達MCP-1的基礎上腹脂素能進一步促進

11、MCP-1表達，腹脂素促進單核細胞表達MCP-1和其激活細胞p38MAPK信號通路有關。 第三章腹脂素對THP-1巨噬細胞CD36表達的影響 背景：動脈粥樣硬化病變的發(fā)展過程中，遷移到內皮下的單核細胞轉化為巨噬細胞后其表面清道夫受體CD36表達增加并促進細胞攝取ox-LDL和高級糖基化終末產物，從而促進巨噬細胞轉變?yōu)榕菽毎?，加速動脈粥樣硬化的進展。在巨噬細胞CD36表達的過程中PPARγ信號途徑激活起著重要作用。腹脂素

12、在頸動脈斑塊和冠脈斑塊上表達豐富，且有腦缺血癥狀的頸動脈粥樣硬化患者腹脂素水平顯著高于無癥狀者，提示腹脂素很可能和動脈粥樣硬化病變的發(fā)展有關。腹脂素是否通過改變單核.巨噬細胞清道夫受體CD36的表達影響動脈粥樣硬化病變進展尚不清楚。 目的：觀察腹脂素單獨或者協(xié)同ox-LDL、葡萄糖對單核-巨噬細胞表達清道夫受體CD36表達和細胞對膽固醇攝取的影響。 方法：將處于對數生長期的THP-1單核細胞予佛波酯誘導分化為巨噬細胞后作

13、為研究對象。通過RT-PCR法檢測細胞CD36和PPARγmRNA的表達水平，用’western-blotting法檢測細胞CD36蛋白水平，從核酸和蛋白的水平來觀察腹脂素、腹脂素+ox-LDL或者腹脂素+葡萄糖對巨噬細胞CD36表達的影響，以及PPARγ信號途徑在腹脂素影響巨噬細胞表達CD36中的作用。 結果： 1.腹脂素能促進THP-1巨噬細胞表達CD36和PPARγ，且其水平越高(觀察濃度100ng/ml～800n

14、g/ml)，刺激THP-1巨噬細胞表達CD36和PPARγ的作用越強，PPARγ抑制劑GW9662能顯著抑制腹脂素促進THP-1巨噬細胞表達CD36的作用。 2.腹脂素+ox-LDL有協(xié)同刺激THP-1巨噬細胞表達CD36和PPARγ的作用，腹脂素水平越高，其協(xié)同刺激THP-1巨噬細胞表達CD36和PPARγ的作用越強，細胞吞噬的脂質量越多，THP-1巨噬細胞泡沫化現象越顯著，PPARγ抑制劑GW9662能顯著抑制腹脂素和ox-

15、LDL促進THP-1巨噬細胞表達CD36和吞噬脂質的作用。 3.腹脂素+葡萄糖有協(xié)同刺激THP-1巨噬細胞表達CD36和PPARγ的作用，腹脂素水平越高，其協(xié)同刺激THP-1巨噬細胞表達CD36和PPARγ的作用越強，PPARγ抑制劑GW9662能顯著抑制腹脂素和高糖促進THP-1巨噬細胞表達CD36的作用。 結論：腹脂素有促進巨噬細胞表達CD36的作用，在ox-LDL或者葡萄糖促進巨噬細胞細胞表達CD36的基礎上腹脂素