高促性腺激素閉經(jīng)、卵巢低反應性患者FSHR-LHCGR基因檢測和14個TSC家系的基因診斷與產(chǎn)前診斷.pdf

1、第一部分高促性腺激素閉經(jīng)、不明原因基礎FSH水平升高及卵巢低反應性患者FSHR與LHCGR基因的突變檢測
　　 目的：對處于生育年齡（小于40歲）而臨床上診斷為高促性腺性閉經(jīng)，基礎FSH水平不明原因升高(大于13mIU/ml)以及控制性超刺激(controlledovarianhyperstimulation，COH)中卵巢低反應患者進行FSHR與LHCGR基因的突變檢測，尋找發(fā)病原因，并提供對其生育進行指導的依據(jù)。
　　

2、 方法：收集16例病例的外周血，提取gDNA，應用聚合酶鏈反應(polymerasechainreaction，PCR)擴增出患者FSHR和LHCGR基因的外顯子及其側翼序列，與正常人對應的PCR產(chǎn)物1:1混合后，應用變性高效液相色譜(denaturinghigh-performanceliquidchromatography，DHPLC)技術對所有擴增子進行突變檢測；DHPLC檢出的可疑突變樣本進一步測序。因FSHR基因的外顯子5(

3、FSHRe5）、FSHRe10-3、FSHRe10-5與LHCGR基因外顯子1(LHCGRe1)、LHCGRe9位點的PCR產(chǎn)物DHPLC檢測峰型不好，難以判斷結果，所以采用直接測序法檢測。
　　 結果：應用PCR-DHPLC-測序或PCR-測序法對16位患者進行FSHR與LHCGR基因的各外顯子及其側翼序列進行突變檢測，發(fā)現(xiàn)僅兩位患者FSHR基因具有突變：患者一的FSHR基因的密碼子(CDS)440發(fā)生GCA→GAA的錯義突變

4、，導致丙氨酸→谷氨酸，中性氨基酸轉變成酸性氨基酸；該突變?yōu)镠GMD(theHumanGeneMutationDatabase)未記載的新突變，因此進一步對100個已生育的正常女性進行該位點的篩查，未發(fā)現(xiàn)該突變?；颊叨腇SHR基因發(fā)生了c.419delA的移碼突變，導致在CDS155提前出現(xiàn)終止密碼子TAA。沒有發(fā)現(xiàn)LHCGR的突變。其余14名患者未發(fā)現(xiàn)突變。
　　 結論：在1例高促性腺激素原發(fā)閉經(jīng)的患者發(fā)現(xiàn)FSHR基因c.41

5、9delA的突變，在1例基礎FSH水平不明原因增高的患者身上發(fā)現(xiàn)了FSHR基因具有CDS440GCA→GAA（丙氨酸→谷氨酸）突變。FSHR基因突變可能是導致這兩位患者卵泡發(fā)育受阻與FSH、LH水平升高的原因。這兩種突變均是HGMD未記載新突變，其中c.419delA為FSHR第一個缺失點突變。兩者均是首次在中國人中發(fā)現(xiàn)的FSHR基因突變。同時我們明確了需進行FSH與LH受體基因診斷的病人標準。
　　 第二部分14個結節(jié)性硬化癥

6、(TSC)家系的基因診斷和產(chǎn)前診斷
　　 目的：篩查結節(jié)性硬化癥病人的基因突變，并應用于產(chǎn)前診斷防止TSC患兒的出生。
　　 方法：應用PCR-DHPLC-測序技術，對近5年來我院就診的14個家系的16名病人進行TSC1和TSC2基因的突變篩查，對峰型有異常者進行測序驗證，必要時進行T/A克隆，針對HGMD未記載的新突變，篩查100名表型正常的無關個體，排除多態(tài)的可能。
　　 結果：在14個家系的16個患者中確定

7、了13個病人具有11種突變和4種多態(tài)，其中HGMD未記載的新突變9種，已記載的致病突變2種（TSC2R1743Q和TSC2c.4541-4544delCAAA）。所發(fā)現(xiàn)的突變包括4種缺失突變(TSC2c.1143delG、TSC2c.1957-1958delAG、TSC2c.4541-4544delCAAA和TSClc.2672delA)、2種剪切突變(TSC2Intron27+1G>A和TSC2Intron5+lG>A)、3種錯義突變

8、(TSC2R1743Q、TSC2L847P和TSClN762S)和2種插入突變(TSC2c.4918insCGCC和TSC2C.910insCT)。其中TSC1基因中只發(fā)現(xiàn)了2種突變(N762S和c.2672delA)，其余9種均為TSC2基因突變。對6個家系（家系1-4、8和9）進行了產(chǎn)前診斷，家系1-4和8的胎兒均未發(fā)現(xiàn)其家族中先證者的突變；胎兒出生后電話隨訪也無TSC的癥狀出現(xiàn)。而家系9攜帶有與其母親一樣的突變。
　　 結