血友病A基因診斷及產前診斷技術的研究.pdf

1、背景:血友病A(Hemophilia A，HA)是最常見的X連鎖隱性遺傳性出血性疾病，其最主要病因是由于凝血因子Ⅷ(FⅧ)基因缺陷而導致FⅧ含量不足或活性下降，從而引起凝血功能障礙，多表現為自發(fā)性出血不止或手術、創(chuàng)傷后出血不止。臨床上根據患者凝血因子Ⅷ促凝活性(FⅧ:C)將其分為重型、中性和輕型，比例分別為50％，10％，40％，其中重型HA中有約50％的是由于F8基因內含子22倒位突變引起的。由于內含子22倒位突變檢測難度大，一直是限

2、制HA基因診斷在臨床上廣泛開展的原因。本病尚無根治方法，只能以凝血因子Ⅷ相關制品替代治療，因此，有必要開展HA的基因診斷及產前診斷，對攜帶者進行早期遺傳學控制，防止此類患兒的出生。
　　 目的:對來我院就診的13個HA家系先證者進行F8基因突變分析，并對家系中女性成員進行攜帶者檢測及高危胎兒進行產前診斷。
　　 方法:應用IS-PCR(inverse shifting-polymerase chain reaction)

3、對HA患者進行F8基因倒位檢測，倒位檢測陰性患者應用聚合酶鏈反應(PCR)和DNA測序的方法進行突變檢測，仍未見突變的患者應用多重酶聯依賴探針擴增(Multiplex ligation-dependent probeamplification，MLPA)進行重復突變檢測。
　　 結果:IS-PCR檢測出6例HA患者存在F8基因內含子22遠端倒位突變;倒位檢測陰性患者直接測序檢出5例存在點突變，其中4例為未見報道的新突變，分別為:

4、c.4875_4876insA，c.6267delG，c.994delT，IVS20-1G＞A; MLPA檢測出1例患者存在exons2～22重復突變，為未見報道的新突變;1例患者未見F8基因突變。攜帶者檢測結果顯示18例女性中10例為該病攜帶者;5個HA家系中高危胎兒產前診斷結果顯示3例為女性攜帶者胎兒，1例為正常女性胎兒，1例為正常男性胎兒。
　　 結論:IS-PCR倒位檢測結合直接測序及MLPA可有效的對HA患者及攜帶者進