乳腺導(dǎo)管擴(kuò)張癥的細(xì)菌學(xué)研究.pdf

1、研究背景
　　 乳腺導(dǎo)管擴(kuò)張癥目前發(fā)病率上升，約占乳腺良性疾病的5％，而且該病病情遷延不愈，許多患者在經(jīng)歷多次手術(shù)復(fù)發(fā)之后不得不選擇切除乳房以達(dá)到治愈。但是該病的病因尚不明確，自發(fā)現(xiàn)該病以來，國(guó)內(nèi)外學(xué)者提出了諸多假說:內(nèi)源性或外源性原因造成乳管引流不暢，分泌物淤積，導(dǎo)致無菌性炎癥發(fā)生;也有學(xué)者認(rèn)為該病與激素失衡有關(guān);較近的文獻(xiàn)則考慮該病與本病與細(xì)菌感染（尤其是厭氧菌、分枝桿菌感染），吸煙有關(guān)。
　　 有學(xué)者發(fā)表論文應(yīng)用經(jīng)

2、典抗結(jié)核藥物（異煙肼，利福平，乙胺丁醇等）治療乳腺導(dǎo)管擴(kuò)張癥，取得了良好治療效果。該學(xué)者率先使用抗癆藥物治療本病是因?yàn)閰⒖剂?002年中華醫(yī)學(xué)會(huì)結(jié)核分會(huì)制定的有關(guān)肺外NTM（非結(jié)核分枝桿菌）病的診斷標(biāo)準(zhǔn):對(duì)于軟組織感染且形成長(zhǎng)期不愈竇道的病灶，臨床上可診斷非結(jié)核分枝桿菌感染。所以他推斷該病也可能是由于非結(jié)核分枝桿菌感染所致。雖然藥物試驗(yàn)足以證明該抗癆治療有效，但是遺憾的是王祈教授一直未能檢測(cè)或培養(yǎng)出結(jié)核桿菌或非結(jié)核分枝桿菌。
　　

3、 堅(jiān)持乳腺導(dǎo)管擴(kuò)張癥是由細(xì)菌感染所致的專家中主要以Dixon教授為代表，他堅(jiān)持認(rèn)為細(xì)菌感染是導(dǎo)致導(dǎo)管擴(kuò)張癥的重要因素，之后不斷有學(xué)者對(duì)導(dǎo)管擴(kuò)張癥患者的切除組織進(jìn)行細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)主要致病為腸球菌，厭氧鏈球菌，金葡菌等;然而也有學(xué)者發(fā)表未能培養(yǎng)出細(xì)菌的文章，這不得不讓人們思考乳腺導(dǎo)管擴(kuò)張癥與細(xì)菌感染到底有沒有關(guān)系，是什么因果關(guān)系。
　　 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br>　　 本研究擬使用分支桿菌培養(yǎng)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法檢分枝桿菌屬，并使

4、用16srDNA通用引物PCR擴(kuò)增后測(cè)序經(jīng)過序列對(duì)比驗(yàn)證細(xì)菌，以進(jìn)一步明確乳腺導(dǎo)管擴(kuò)張癥的細(xì)菌學(xué)病因。
　　 對(duì)象與方法
　　 (1)結(jié)核桿菌檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組:選擇2010年8月-10月于我院治療新發(fā)5例導(dǎo)管擴(kuò)張癥膿腫期患者。于手術(shù)室無菌環(huán)境下切開皮膚，收集膿液，每例患者收集3管，共收集樣本15管。
　　 16srDNA引物實(shí)驗(yàn)組:按照同樣方法收集2007.2-2011.10期間，于我院進(jìn)行治療的乳腺導(dǎo)管擴(kuò)張癥11例患

5、者的組織或者膿液。連同分支桿菌實(shí)驗(yàn)組的5例患者的備用標(biāo)本合并為16例標(biāo)本進(jìn)行16srDNA引物PCR實(shí)驗(yàn)組。
　　 (2)從我科乳腺纖維腺瘤患者數(shù)據(jù)庫(kù)篩選出不伴有導(dǎo)管擴(kuò)張癥的患者，與研究組16例患者按照年齡（±2歲）、就診時(shí)間（±1年）情況按1∶3進(jìn)行配對(duì)，作為對(duì)照組。所有數(shù)據(jù)分析應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件完成。
　　 (3)分支桿菌培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)組:對(duì)標(biāo)本進(jìn)行預(yù)處理后接種于分支桿菌培養(yǎng)基，進(jìn)行每周3次、為期8周的觀察。<

6、br>　　 分支桿菌PCR實(shí)驗(yàn)組:經(jīng)過DNA提取、擴(kuò)增后置于Lightcycler480PCR儀進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)。
　　 16srDNA引物PCR實(shí)驗(yàn)組:設(shè)計(jì)細(xì)菌16srDNA通用引物，對(duì)PCR體系(25ul)進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳后進(jìn)行高通量測(cè)序，將測(cè)得序列與Blast系統(tǒng)比對(duì)，以明確細(xì)菌類型。
　　 結(jié)果
　　 (1)本次研究應(yīng)用的分支桿菌培養(yǎng)及實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)分支桿菌結(jié)果均為陰性，初步斷定5位

7、患者的膿液及組織標(biāo)本中不含分枝桿菌屬細(xì)菌或者含有細(xì)菌量較少，低于兩種方法檢測(cè)閾值，故未出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果。
　　 (2)16srDNA引物PCR實(shí)驗(yàn)組每組細(xì)菌均出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果，測(cè)序序列經(jīng)過Blast系統(tǒng)比對(duì)后分別為假單胞菌50％（其中銅綠假單胞菌31.25％，未培養(yǎng)假單胞菌12.5％，耳炎假單胞菌6.25％），葡萄球菌6.25％，芽孢八疊球菌6.25％，堅(jiān)硬芽孢桿菌6.25％，屎腸球菌6.25％，宏基因組文庫(kù)的細(xì)菌25％。