Sox2對(duì)Tregs的招募及對(duì)腫瘤微環(huán)境的影響.pdf

1、目的：在腫瘤發(fā)生發(fā)展的過(guò)程中，存在很多因素阻礙免疫系統(tǒng)發(fā)揮對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。除了腫瘤細(xì)胞本身的免疫逃逸，腫瘤微環(huán)境中的免疫抑制細(xì)胞--調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Regulatory T cells，Tregs)也起到了重要作用。目前，腫瘤細(xì)胞對(duì)Tregs招募作用的機(jī)理是當(dāng)前腫瘤免疫的研究熱點(diǎn)之一。轉(zhuǎn)錄因子SOX2是維持胚胎干細(xì)胞及腫瘤干細(xì)胞多樣性的重要基因，并且已經(jīng)證實(shí)，SOX2在多種腫瘤的發(fā)生及轉(zhuǎn)移進(jìn)程中起了重要作用。腫瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞如何招募

2、Tregs并影響腫瘤微環(huán)境的機(jī)制尚未明確。本課題將探討Sox2對(duì)Tregs的招募作用及其分子機(jī)理。
　　 方法：首先，本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用免疫組化的方法分別檢測(cè)了225例乳腺癌組織、45例癌旁組織、17例正常乳腺上皮組織、9例轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織及9例無(wú)轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中SOX2和Foxp3的表達(dá)情況。其次，建立了Sox2基因沉默的穩(wěn)定細(xì)胞系，通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)了細(xì)胞系中與Tregs招募相關(guān)的細(xì)胞因子，CCL1、CCL22及CCL28；同時(shí)在

3、乳腺癌移植模型中檢測(cè)了Sox2對(duì)Tregs的招募作用及其對(duì)相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)的影響。再次，運(yùn)用Western blot和Real-timeRT-PCR分析SOX2對(duì)Tregs招募相關(guān)的細(xì)胞因子的調(diào)控作用及其信號(hào)通路。最后，使用FACS、免疫熒光及Real-time RT-PCR分析腫瘤組織和脾臟中T細(xì)胞比例的變化，同時(shí)檢測(cè)Th1、Th2相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)變化，證明Sox2對(duì)腫瘤微環(huán)境的重塑。
　　 結(jié)果：我們發(fā)現(xiàn)在腫瘤組織中有44

4、.1％的標(biāo)本表達(dá)Foxp3，且其表達(dá)水平與SOX2的表達(dá)水平正相關(guān)；體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)均表明，Sox2基因沉默后，其對(duì)Tregs的招募作用會(huì)明顯下降，同時(shí)，與Tregs招募相關(guān)的細(xì)胞因子CCL1、CCL22及CCL28的表達(dá)水平隨著腫瘤微環(huán)境中Foxp3、CD31和Lyve-1表達(dá)量的降低及CD8+T細(xì)胞的增加而降低；同時(shí)，Th1相關(guān)的標(biāo)志分子表達(dá)量增加，Th2相關(guān)的標(biāo)志分子表達(dá)量降低。另外，通過(guò)瘤內(nèi)注射CCL22和CCL28細(xì)胞因子，發(fā)現(xiàn)

5、小鼠腫瘤中Tregs的比例增加，并恢復(fù)了由沉默Sox2對(duì)腫瘤微環(huán)境造成的影響。這些結(jié)果說(shuō)明，Tregs在Sox2對(duì)腫瘤微環(huán)境調(diào)控的過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。最后，我們檢測(cè)了與CCL1、CCL22及CCL28分泌相關(guān)的NF-kB信號(hào)通路，發(fā)現(xiàn)Sox2可以對(duì)其進(jìn)行調(diào)控，在沉默Sox2的細(xì)胞系中，NF-kB信號(hào)通路的活性降低。這些結(jié)果支持了我們的假設(shè)，即Sox2對(duì)Tregs具有招募作用且對(duì)腫瘤微環(huán)境造成影響。
　　 結(jié)論：我們的實(shí)驗(yàn)證明S