腫瘤壞死因子α基因啟動子多態(tài)性與沙利度胺治療多發(fā)性骨髓瘤關(guān)系的研究.pdf

1、多發(fā)性骨髓瘤(multiplemyeloma，MM)是漿細胞惡性增殖性疾病。一些細胞因子異常，可影響正常B細胞激活、發(fā)育和分化，對MM發(fā)生、發(fā)展均起到關(guān)鍵性作用，其中TNF-α是研究的比較充分的細胞因子之一。MM患者外周血TNF-α水平明顯升高，經(jīng)抗TNF-α治療，MM得到有效控制，進一步支持TNF-α對MM發(fā)生、發(fā)展的重要作用。TNF-α表達在轉(zhuǎn)錄水平受到調(diào)控，TNF-α基因啟動區(qū)多態(tài)性在TNF-α生成中起基因調(diào)控作用。迄今為止，人們

2、針對不同種族、疾病類型，采用多種方法研究TNF-α基因多態(tài)性與TNF-α表達的關(guān)系，尤其是對TNF-α基因啟動區(qū)-308、-230位點多態(tài)性的研究成為近幾年的熱點，但研究結(jié)果并不一致，考慮與不同種族、疾病有關(guān)。沙利度胺(ThalidomidaThal)，因具有抗血管生成、抗TNF-α及免疫調(diào)節(jié)等作用，廣泛用于MM治療，并取得較好療效。因Thal有一定的副作用，不同個體對其反應(yīng)不同，應(yīng)嚴格掌握用藥指征，故有必要研究Thal治療MM的療效與

3、F-α基因表達的關(guān)系，以期指導個體化治療。為明確中國漢族人MM患者TNF-α基因啟動區(qū)-308、-238位點多態(tài)性及其與MM易感性的關(guān)系，該文采用SSP-PCR(sequencespecificprimer-PCR)方法檢測中國漢族MM患者與健康對照者TNF-α-308、-238位點等位基因頻率，雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(EnzymeLinkedImmunosorbentAssayELISA)，按照試劑盒說明，測定外周血TNF-α水平。

4、 目的 檢測TNF-α基因啟動區(qū)-308、-238位點等位基因頻率，測定健康人、MM患者血漿TNF-α水平，探討TNF-α基因啟動區(qū)-308、-238位點多態(tài)性與多發(fā)性骨髓瘤(MM)易感性的關(guān)系及其與沙利度胺治療多發(fā)性骨髓瘤療效的相關(guān)性。 方法 (1)抽取MM患者、健康對照者5ml枸櫞酸鈉抗凝靜脈血，以淋巴細胞分離液分離單個核細胞后，以DNA-ZOL按說明書要求提取基因組DNA，溶于無菌蒸餾水中，紫外分光

5、光度法測定DNA濃度、純度，提取物現(xiàn)用或-20℃冰箱保存；健康人、MM患者血漿用EDTA抗凝，在搜集后30分鐘內(nèi)使用，或儲存在-80℃冰箱直至使用。 (2)將Thal治療的MM患者分為治療有效組、無效組，所有病例均于治療前留取血漿標本，治療有效組在最大反應(yīng)率時留取標本，治療無效組在治療結(jié)束后留取標本，ELISA方法檢測健康人、MM患者血漿TNF-α水平測定治療前后血漿TNF-α水平， (3)SSP-PCR方法檢測56例難

6、治、復發(fā)中國漢族MM患者、114名健康中國漢族人TNF-α啟動區(qū)-308、-238位點等位基因A/G頻率，3％瓊脂糖凝膠電泳檢查PCR產(chǎn)物，PCR產(chǎn)物純化后克隆測序。 結(jié)果 (1)SSP-PCR擴增片段的長度為110bp，位于TNF-α啟動區(qū)，4對引物擴增產(chǎn)物的測序結(jié)果均為我們的目的條帶，即-308、-238位點堿基分別為G、G，A、G，G、A，A、A。56例難治、復發(fā)中國漢族MM患者、114名健康中國漢族人-238位點

7、等位基因A/G頻率分別為：17/112，15.18％；36/228，15.79％，兩組間無明顯差異(P=0.884)；MM組、對照組-308位點等位基因A頻率分別為2/112，1.79％；21/228，9.21％，兩組間有顯著差異(P=0.010)，MM組明顯低于對照組。 (2)測定的31例難治復發(fā)MM患者、9例健康人血漿TNF-α濃度，分別是(79.11±72.0346pg/ml；12.02±3.6570pg/ml，P＜0.0

8、500)，MM患者與健康對照組血漿TNF-α水平有明顯差異，患者明顯高于健康人。 (3)反應(yīng)停治療有效組、無效組TNF-α基因啟動區(qū)-238位點A/G頻率分別為：5/4610.86％；2/1612.5％P=0.8591，兩組間無明顯差異；-238位點.為A(n=7)與為G(n=24)的患者血漿TNF-α水平分別為(64.6851±71.0250pg/ml；112.1501±161.0436pg/mlP=0.5690)兩組間無明顯

9、差異，所測31份患者標本-308位點均為G。 (4)Thal治療無效組，治療前后血漿TNF-α水平，分別是(54.0688±6.4732pg/ml；54.4672±3.3512pg/ml，P=0.8731)，兩者無明顯差異；反應(yīng)停治療有效組，治療前后血漿TNE-α水平分別是(55.2854±11.3558pg/ml；29.2842±11.5684pg/ml，P=0.0001)，治療后TNF-α水平明顯降低。 結(jié)論

10、 (1)在所研究的人群中未發(fā)現(xiàn)TNF-α基因啟動子-238位點多態(tài)性與MM易感性相關(guān)，但MM患者TNF-α基因啟動區(qū)-308位點A的頻率明顯低于對照組，推測TNF--α基因啟動區(qū)-308位點堿基為A是保護性因素。 (2)MM患者TNF-α水平明顯高于健康人。 (3)Thal治療有效組與無效組-238、-308位點基因型無統(tǒng)計學差異，-238、-308位點等位基因A/G頻率與血漿TNF-α水平無明顯差異，未顯示出TNF-α