應(yīng)用蛋白質(zhì)芯片技術(shù)分析鼠疫耶爾森菌致病相關(guān)蛋白抗體表達(dá)譜的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、該研究首先運(yùn)用生物信息學(xué)技術(shù),并結(jié)合鼠疫耶爾森菌基因組學(xué)和比較基因組學(xué)的初步研究結(jié)果,選擇了57個(gè)可能編碼外膜蛋白、粘附蛋白、侵襲性蛋白和對(duì)宿主細(xì)胞毒性的基因作為擬克隆和表達(dá)的目的基因.通過PCR技術(shù)、基因克隆和表達(dá)技術(shù)將上述目的基因克隆入表達(dá)載體pET32a/BL21中,獲得了47個(gè)可以在大腸桿菌中正確表達(dá)目的蛋白的重組克隆子,其表達(dá)的目的蛋白占菌體總蛋白的30％-50%.目的蛋白經(jīng)Ni-NTA純化試劑盒純化后純度均大于85%.這些純

2、化的蛋白質(zhì)作為探針被固定在玻片上制成鼠疫耶爾森菌致病相關(guān)蛋白芯片.此芯片再與定期收集的經(jīng)鼠疫耶爾森菌免疫的動(dòng)物血清(新西蘭兔、羊)或自然感染鼠疫動(dòng)物(狗)血清進(jìn)行FLISA反應(yīng),反應(yīng)結(jié)果經(jīng)掃讀后進(jìn)行數(shù)據(jù)分析.由此可實(shí)現(xiàn)對(duì)待測血清樣品中鼠疫耶爾森菌致病相關(guān)蛋白相應(yīng)抗體的平行檢測,用以比較上述動(dòng)物體內(nèi)各種鼠疫耶爾森菌致病相關(guān)蛋白相應(yīng)抗體出現(xiàn)的速度、滴度以及持續(xù)時(shí)間的差異.同時(shí)還可以比較上述各種致病相關(guān)蛋白在不同種屬的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中免疫性的差異.

3、研究結(jié)果還表明重組蛋白F1,OmpA(YPO1435),Lpp(YPO2394)有可能用于鼠疫感染的血清學(xué)診斷.YopE(YPCD1.06),YopK(YPCD1.19),YopD(YPCD1.28),YopN(YPCD1.39),YopR(YPCD1.57),Ymt(YPMT1.74),YPO1303,YPO1411,YPO2945中可能存在鼠疫的候選疫苗組分.該研究表明利用蛋白質(zhì)芯片技術(shù)和間接免疫熒光檢測技術(shù),可以檢測出待測血清樣品