肺透明膜病新生兒ECR1（CD35）基因多態(tài)性、數(shù)量及天然免疫活性的變化.pdf

1、目的：新生兒肺透明膜病(hyalinemembranedisease,HMD)，又稱新生兒呼吸窘迫綜合征(neonatalrespiratorydistresssyndrome,NRDS)是臨床新生兒尤其是早產兒常見的危重綜合征。重癥病例均于2天內死亡，其中重要原因之一為繼發(fā)性細菌感染，存活32小時以上者常合并肺炎。隨著呼吸機輔助呼吸以及肺表面活性物質應用等新生兒救治技術的不斷提高，患兒存活率不斷提高。但因HMD患兒尤其是重癥患兒多需氣

2、管插管呼吸機輔助呼吸使氣道開放，并且氣管內吸痰等侵入性操作增加，使肺部甚至全身受感染機會增加。存活者中肺炎甚至慢性肺疾病CLD(chroniclungdisease)的發(fā)病率和病死率也隨之增加。故臨床除需注意無菌操作外，機體免疫狀態(tài)的變化與HMD病理變化、病情演變及預后的關系也至關重要。 天然免疫(非特異性免疫)是機體防御反應中的重要環(huán)節(jié)。紅細胞是重要的天然免疫細胞，其許多免疫功能是其它免疫細胞所無法代替的。當致病原進入血液循環(huán)

3、時，紅細胞可免疫粘附致病原產生快速免疫粘附反應，激起一系列天然免疫和適應性免疫反應。紅細胞的免疫黏附功能是通過紅細胞Ⅰ型補體受體(Complementreceptor1onerythrocyte，ECR1)為基礎實現(xiàn)的。目前研究表明紅細胞粘附腫瘤細胞能力與ECR1密度基因多態(tài)性呈正相關，紅細胞清除免疫復合物的能力與ECR1數(shù)量密切相關，而ECR1基因HindⅢ多態(tài)性決定ECR1在紅細胞表面的數(shù)量表達。 ECR1基因多態(tài)性、數(shù)量表

4、達及粘附活性的變化對許多疾病的發(fā)生、發(fā)展及病理過程有著密切相關。臨床多種疾病的紅細胞免疫功能測定對疾病輔助、鑒別診斷、療效觀察、預后判斷、病情轉歸方面都有重要意義。在成人多種疾病已有研究并取得成績，但新生兒領域報道甚少。本文將研究新生兒及HMD患兒的ECR1基因多態(tài)性表達、數(shù)量及活性變化規(guī)律，為臨床判斷病情、預后，指導臨床用藥提供依據(jù)，達到及時救治、降低病死率，減少后遺癥，提高患兒生活質量的目的。 方法：本試驗中所有研究對象均來

5、自河北省兒童醫(yī)院新生兒科在2004年11月至2005年6月收治的新生兒，分為兩組。病例組16例[性別比(男/女)=11/5；胎齡：33.25±3.66周；體重：2.01±0.35千克；產式比(剖宮產/順產)=7/9]，其中未應用肺表面活性物質固爾蘇者4例(其中2例因家庭經濟困難于入院后第2天及第3天放棄治療)，后期合并肺炎者2例。其臨床表現(xiàn)及胸部X光表現(xiàn)和血氣分析結果均符合新生兒肺透明膜病診斷，無感染性疾病表現(xiàn)；對照組為同期我院在新生兒

6、科住院寄養(yǎng)無其他合并癥的早產兒，共26例[性別比(男/女)=17/9；胎齡：33.69±1.74周；體重：2.06±0.56千克；產式比(剖宮產/順產)=13/13]。兩組患兒在出生性別、出生體重、胎齡和產式比上無顯著統(tǒng)計學差異，P均＞0.05。 新生兒肺透明膜病診斷參照第3版《實用新生兒學》。所有患兒的母親均無絨毛膜羊毛膜炎病史，分娩前均無激素、鎮(zhèn)靜劑、止痛劑及抗生素病史。兩組患兒均于生后24小時(病例組于應用固爾蘇前采集)及

7、生后7天采集外周靜脈血(枸櫞酸鈉抗凝)1ml送檢。標本于采血后2小時內進行試驗。將標本離心(2000RPM)5min，取自身血漿100ul和沉淀紅細胞1ul，加到靶細胞管中，立即進行ECR1天然免疫粘附功能(EIIAF)即ECR1活性的測定；取10ul沉淀紅細胞，用生理鹽水洗滌2次，固定后用酶聯(lián)免疫法定量測定ECR1分子的數(shù)量；上兩步使用后的全血充分混勻，取100ul全血加到1.5ml離心管中(留取備份)，于-20℃保存待檢，采用PCR

8、和HindⅢ酶切技術測定ECR1分子基因多態(tài)性。 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS11.5統(tǒng)計分析軟件進行處理。計量資料以均數(shù)±標準差((x)±s)表示。檢驗水準為雙側α=0.05。組間均衡性比較使用成組t檢驗或x2檢驗；兩組基因類型的構成比較使用x2檢驗；兩組間基因多態(tài)性、數(shù)量和活性比較采用兩樣本比較的Willcoxon秩和檢驗；各組第1天和第7天基因多態(tài)性、數(shù)量及活性的比較使用Willcoxon符號秩和檢驗；基因類型、數(shù)量和活性間的相

9、關性分析采用Spearman等級相關。 結果：組間一般資料的比較差異無顯著意義，P均＞0.05。兩組間ECR1基因多態(tài)性構成無顯著性差異，x2=2.660P＞0.05。具體構成情況見表2及圖5。第1天和第7天比較，無論對照組還是病例組ECR1數(shù)量變化均無差異性(P＞0.05)，但ECR1活性在對照組和病例組中均有變化(統(tǒng)計量值分別為-3.424和-2.524，P均＜0.05)。第1天病例組和對照組ECR1活性差異有顯著性(z=-

10、2.126，P＜0.05)，但ECR1數(shù)量差異無顯著性(z=-1.493，P＞0.05)；在第7天病例組和對照組間ECR1數(shù)量和活性差異均無顯著性(P均＞0.05)。對照組ECRI基因類型和活性間存在相關性，等級相關系數(shù)分別為0.528、0.568，P均＜0.01，而其他指標間無相關性(P＞0.05)。實驗組3個指標間均無相關性(P＞0.05)。 結論：1.對照組及病例組第7天ECR1活性均較第1天升高，提示隨日齡增加新生兒紅細

11、胞免疫粘附活性有增強趨勢。2.第1天病例組ECR1活性較對照組減低，提示HMD患兒ECR1活性受到了影響，其活性降低。病情恢復期ECR1活性升高，其升高程度較對照組高，提示HMD患兒ECR1活性隨病情恢復而提高。第7天ECR1的活性和對照組雖無統(tǒng)計學上的差異，但是視覺上還是較對照低一些，說明其活性尚未完全恢復。3.兩組患兒第1天與第7天ECR1數(shù)量比較均無顯著差異，提示生后1周內新生兒ECR1數(shù)量變化不明顯。兩組間ECR1數(shù)量差異無顯著

12、性，提示ECR1數(shù)量可能未受到新生兒肺透明膜病的影響。4.兩組間ECR1基因多態(tài)性構成無顯著差異，說明ECR1基因多態(tài)性與新生兒肺透明膜病發(fā)病易感性無相關性。本研究結果第1天與第7天對照組ECR!基因類型和活性間均存在相關性，與郭峰等人研究中提到的紅細胞粘附能力與紅細胞CR1密度多態(tài)性呈正相關的理論相符。5.本研究未得到預期ECR1數(shù)量與活性的相關性的結果，考慮是因為ECR1活性除受到CR1數(shù)量，尚受到其它因素的影響。6.因肺表面活性物

13、質的合理應用，及我院新生兒重癥監(jiān)護病房(NICU)無菌操作執(zhí)行嚴格，并發(fā)呼吸機相關肺炎者僅有兩例，這可能是本研究HMD患兒恢復期ECR1活性得以較快恢復的原因之一。 總之，急性期HMD患兒的紅細胞粘附能力下降，可能是HMD患兒的一個共同特征，可能與HMD患兒上呼吸機后易感染有一定關系。本研究提示紅細胞粘附能力與紅細胞CR1密度多態(tài)性呈正相關，ECR1基因多態(tài)性、及免疫粘附活性水平的測定，對HMD患兒感染易感性及轉歸預測，及時采取