粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子在失血性休克誘導(dǎo)的急性肺損傷發(fā)病機(jī)制中的作用.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)通過在失血性休克前過度通氣時(shí)經(jīng)鼻滴入地塞米松(dexamethasone，DEX)和不同劑量的特異性抗粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(granulocytemacrophagecolony-stimulatingfactor，GM-CSF)抗體(22E9)，觀察DEX和不同劑量的22E9對(duì)失血性休克誘導(dǎo)的急性肺損傷(acutelunginjury，ALI)小鼠肺組織病理、肺巨噬細(xì)胞TOLL樣受體-4(TLR4)表達(dá)、肺干/濕比

2、、肺組織核因子-κB(NF-κB)的活化和腫瘤壞死因子(tumornecrosisfactor，TNF)-α的影響，以及對(duì)心、肝、腎組織NF-κB的活化和心臟組織TNF-α的影響。探討22E9和DEX在防治失血性休克誘導(dǎo)的ALI發(fā)病機(jī)制中的作用。 材料和方法：C57BL/6雄性小鼠75只，隨機(jī)分為5組：陰性空白對(duì)照組(NCG組)；單純失血性休克模型組(PCG組)；失血性休克1ug/只22E9干預(yù)組(HS1組)；失血性休克10ug

3、/只22E9干預(yù)組(HS10組)；失血性休克20ug/只DEX干預(yù)組(DEX組)。每組分別在小鼠心臟穿刺前造成過度通氣，并經(jīng)鼻滴入35ul的液體，每組35ul液體中所含成分依次分別為PBS、PBS、PBS+1ug22E9、PBS+10ug22E9、PBS+20ugDEX。NCG組僅于心臟穿刺，其余四組通過心臟穿刺采取30％的全血容量復(fù)制失血性休克誘導(dǎo)的ALI模型。在0h、1h、2h、4h、6h五個(gè)時(shí)相點(diǎn)分別取出小鼠的肺、心、肝、腎組織，

4、直接檢測(cè)肺組織濕/干比的變化，通過凝膠電泳遷移率改變法(electrophoreticmobilityshiftassay，EMSA)檢測(cè)肺、心、肝、腎組織的NF-κB活性，酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA)法檢測(cè)肺、心組織的TNF-α，HE染色法觀察肺組織的病理以及免疫熒光雙染法觀察肺巨噬細(xì)胞TLR4的表達(dá)。 結(jié)果： ①肺組織病理的情況：PCG組和DEX組出現(xiàn)

5、肺泡隔明顯增寬，大量的中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)和紅細(xì)胞滲出，肺泡腔內(nèi)可見巨噬細(xì)胞、肺多形核白細(xì)胞。HS10組出現(xiàn)肺泡隔增寬，有中性粒細(xì)胞和紅細(xì)胞滲出，肺泡腔內(nèi)較為干爽，HS10組病理改變較HS1組顯著。以上四組病理改變均比NCG組顯著。 ②肺巨噬細(xì)胞TLR4的表達(dá)的情況：NCG組心臟穿刺后6h內(nèi)肺巨噬細(xì)胞TLR4的表達(dá)未見明顯改變。PCG組失血性休克后6h內(nèi)肺巨噬細(xì)胞TLR4的表達(dá)呈上升趨勢(shì)并于6h時(shí)達(dá)到高峰，各時(shí)相點(diǎn)顯著高于NCG組。H

6、S1組各時(shí)相點(diǎn)肺巨噬細(xì)胞TLR4的表達(dá)均低于相對(duì)應(yīng)的PCG組，但均高于相對(duì)應(yīng)的NCG組。類似的結(jié)果出現(xiàn)在HS10組，但HS10組多數(shù)時(shí)相點(diǎn)高于相對(duì)應(yīng)的HS1組。DEX組的結(jié)果同PCG組相似，其各時(shí)相點(diǎn)肺巨噬細(xì)胞TLR4的表達(dá)均高于相對(duì)應(yīng)的HS1組及HS10組。 ③肺組織NF-κB活性的變化情況：PCG組NF-κB的活性隨時(shí)間而中間增強(qiáng)并于4h時(shí)達(dá)到高峰，6h時(shí)出現(xiàn)下降，相似的結(jié)果亦出現(xiàn)在NCG組；PCG組NF-κB的活性在各時(shí)相

7、點(diǎn)均高于相對(duì)應(yīng)的NCG組，且在4h和6h時(shí)兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。HS1組和HS10組均低于相對(duì)應(yīng)的PCG組，多數(shù)時(shí)相點(diǎn)與對(duì)應(yīng)PCG組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；HS10組NF-κB的活性在6h內(nèi)由最初的低于HS1組逐漸轉(zhuǎn)變成高于HS1組，且在4h、6h時(shí)兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。DEX組各時(shí)相點(diǎn)與PCG組差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 ④肺組織TNF-α的變化情況：PCG組TNF-α隨時(shí)間而逐漸增加并于

8、6h時(shí)達(dá)到高峰，相似的結(jié)果亦出現(xiàn)在NCG組，但PCG組在多數(shù)時(shí)相點(diǎn)TNF-α均高于相對(duì)應(yīng)的NCG組，且兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。HS1組和HS10組均低于相對(duì)應(yīng)的PCG組，且多數(shù)時(shí)相點(diǎn)與對(duì)應(yīng)PCG組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；當(dāng)6h時(shí)HS1組TNF-α顯著低于HS10組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。DEX組各時(shí)相點(diǎn)與PCG組差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，各相點(diǎn)TNF-α均高于相對(duì)應(yīng)的HS1組和HS10組。 ⑤肺水含

9、量的變化情況(W/D值)：NCG組在各時(shí)相點(diǎn)肺濕/干比未見明顯變化。PCG組隨時(shí)間濕/干比呈逐漸上升趨勢(shì)，HS1組、HS10組、DEX組呈下降趨勢(shì)。PCG組、HS1組、HS10組和DEX組濕/干比均顯著高于相對(duì)應(yīng)的NCG組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。HS1、HS10及DEX組在多數(shù)時(shí)相點(diǎn)濕/干比均顯著低于相對(duì)應(yīng)的PCG組，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。HS1、HS10及DEX三組之間多數(shù)對(duì)應(yīng)時(shí)相點(diǎn)差異未有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

10、 ⑥失血性休克后4h時(shí)心、肝、腎組織NF-κB活性的變化：心、肝、腎組織NF-κB的活性PCG組均顯著高于NCG組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。HS1組和HS10組可顯著抑制肝、心組織NF-κB的活性(P＜0.05)，HS1組的抑制效果較HS10組顯著。HS10組增強(qiáng)了腎組織NF-κB的活性(P＜0.05)；DEX組增強(qiáng)了腎組織NF-κB的活性(P＜0.05)，而且對(duì)心、肝組織NF-κB的活性未見其有顯著性的抑制作用。

11、 ⑦失血性休克后4h時(shí)心臟組織TNF-α的變化情況：PCG組TNF-α顯著高于NCG組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。HS1組和HS10組TNF-α顯著低于PCG組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)：HS1組和HS10組兩組之間未見明顯差異。DEX組TNF-α顯著高于HS1組和HS10組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 結(jié)論： ①22E9能顯著抑制肺巨噬細(xì)胞TLR4的表達(dá)。 ②22E9能顯著抑制

12、失血性休克誘導(dǎo)的ALI小鼠肺組織NF-κB的活化及炎癥反應(yīng)，改善肺損傷。 ③22E9能顯著抑制失血性休克誘導(dǎo)小鼠心、肝、腎組織NF-κB的活化及炎癥反應(yīng)，減少失血性休克引起多器官損傷。 ④DEX(20ug/只)不能有效抑制失血性休克誘導(dǎo)的ALI小鼠肺組織NF-κB的活化及炎癥反應(yīng)，不能有效改善肺損傷。 ⑤DEX(20ug/只)不能有效抑制失血性休克誘導(dǎo)小鼠心、肝、腎組織NF-κB的活化及心臟的炎癥反應(yīng)，不能有效減