粒細(xì)胞集落刺激因子治療急性腎缺血再灌注損傷的研究.pdf

1、背景及目的：
　　 急性腎功能衰竭(ARF)是多種因為導(dǎo)致的腎功能急驟下降而出現(xiàn)的綜合征,臨床上病死率很高,除血液透析外尚無有效的治療方法,是臨床治療的難點。其中缺血再灌注損傷是ARF最常見的病因,腎臟手術(shù)、腎移植及彌散性血管內(nèi)出血均可引起腎臟缺血再灌注損傷,其主要的病理表現(xiàn)為急性腎小管壞死。另外,近年來研究指出:腎小管周血管的損傷也是腎功能衰竭的一個重要因為。因此,如何減輕腎小管的壞死、恢復(fù)腎小管的結(jié)構(gòu)和功能及修復(fù)損傷的腎小管

2、周血管是治療ARF的重要切入點。
　　 粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)是體內(nèi)一種重要的造血調(diào)節(jié)因子,是骨髓干細(xì)胞(包括造血干細(xì)胞、骨髓基質(zhì)干細(xì)胞、內(nèi)皮干/組細(xì)胞)強有力的動員劑,可大大提高外周血的干細(xì)胞數(shù)量。
　　 骨髓來源干細(xì)胞是一群未分化的細(xì)胞,具有自我更新和多向分化潛能。已有大量研究報道:骨髓干細(xì)胞能夠歸巢到受損組織區(qū)域,參與損傷組織的修復(fù),并能改善其功能,同時也可以分化成多種祖細(xì)胞?；诠撬韪杉?xì)胞的這些特性,它

3、已成為組織工程學(xué)的一種重要“種子”細(xì)胞,在心臟疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病中,骨髓干細(xì)胞移植中均表現(xiàn)出了肯定療效。
　　 干細(xì)胞所具有的遷移、修復(fù)、替代和再生的能力為臨床醫(yī)學(xué)提供了一個發(fā)展新療法的機會。依據(jù)干細(xì)胞的生物學(xué)特性及其在多種損傷性疾病中的治療作用,我們認(rèn)為G-CSF動員骨髓來源干細(xì)胞治療腎損傷疾病可能有效。本研究通過制備小鼠急性腎缺血再灌注損傷模型,經(jīng)皮下注射G-CSF動員骨髓干細(xì)胞,于注射后的不同時間點檢測干細(xì)胞動員情況、腎功

4、能指標(biāo)(如BUN及Scr)、腎臟病理組織學(xué)、腎小管上皮細(xì)胞及小管周血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖情況等指標(biāo),評價G-CSF在小鼠急性腎缺血再灌注模型中的療效問題,并初步探討G-CSF動員骨髓源干細(xì)胞治療急性腎缺血再灌注損傷的機制。
　　 材料與方法
　　 選擇18-20g(6-8周齡)的BALB/c(H-2K6)小鼠建立動物模型。80只小鼠采用無損傷微血管夾夾閉雙側(cè)腎蒂40分鐘后隨即分為G-CSF治療組和I/R組,于再灌注后1小時、

5、3天、6天、9天,經(jīng)皮下注射G-CSF(10μg/kg)或等量的生理鹽水。再灌注后第1天、4天、7天和10天時收集血樣,流式細(xì)胞儀檢測外周血CD34+細(xì)胞數(shù),采用全自動生化分析儀測定血清肌酐和尿素氮。摘取雙側(cè)腎臟,行組織病理組織學(xué)檢測,根據(jù)Paller標(biāo)準(zhǔn)對腎臟的病理改變進(jìn)行評分,免疫組化染色檢測CKl8及Ⅷ因子相關(guān)抗原(FⅧ-RAg)的表達(dá)情況,以CK18陽性的腎小管上皮細(xì)胞數(shù)及FⅧ-Rag陽性的小管周血管內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)反應(yīng)腎小管上皮細(xì)胞

6、及小管周血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.成功建立小鼠急性腎缺血再灌注損傷模型,成功率可達(dá)90％。
　　 2.與I/R組對比,G-CSF治療組再灌注后第1天、4天、7天和10天外周血中CD34+細(xì)胞數(shù)明顯升高(P<0.05),且G-CSF治療組再灌注后第4天外周血CD34+細(xì)胞數(shù)達(dá)到最高值。
　　 3.再灌注后第1天,I/R組與G-CSF治療組血清BUN及Scr均達(dá)到最高值,且兩組之間沒有

7、差別(P>0.05)。再灌注后第4天和第7天,G-CSF治療組較I/R組血清BUN值、Scr值明顯降低(P<0.05)。再灌注后第10天,兩組血清BUN值、Scr值無明顯差別(p>0.05)；G-CSF治療組小鼠的腎功能恢復(fù)較早。
　　 4.光鏡下觀察G-CSF治療組的腎臟病理改變較I/R組明顯減輕。再灌注后第1天I/R組和G-CSF治療組腎臟HE評分兩組之間沒有差別(P>0.05),再灌注后第4、7及10天時的腎臟HE評分顯示

8、,G-CSF治療組的評分均較I/R組明顯減低(P<0.05)。
　　 5.與I/R組相比,G-CSF治療組再灌注后第1、4、7及10天的CK18陽性腎小管上皮細(xì)胞數(shù)無明顯差別(P>0.05)。再灌注后第1天G-CSF治療組FⅧ-Rag陽性小管周微血管內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)與I/R組相比無明顯差異(P>0.05),再灌注后第4、7、10天G-CSF治療組FⅧ-Rag陽性小管周微血管內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)與I/R組相比增高(P<0.05)。G-CSF治療組