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文檔簡介
1、該研究首先通過PCR將家蠶桿狀病毒多角體蛋白起始密碼子后的18個堿基引入到hGM-CSF基因的5'端之前,然后將融合基因重組與家蠶桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體pBacPAK8中,獲得重組轉(zhuǎn)移載體pBacPAK8-6aa-hGM-CSF,并與線性化Bm-BacPAK6DNA共轉(zhuǎn)染家蠶細胞株,獲得重組病毒BacPAK-6aa-hGM-CSF.PCR和Southern雜交結(jié)果表明重組病毒基因組中含有6aa-hGM-CSF基因.重組病毒以MOI=10感染家
2、蠶細胞(2×10<'6>個細胞/5ml),以MOI=5接種家蠶5齡幼蟲,結(jié)果發(fā)現(xiàn):1、采用GM-CSF依賴細胞株TF-1和MTT比色法測定表達產(chǎn)物的生物活性,細胞內(nèi)表達產(chǎn)物、家蠶幼蟲和蠶蛹體液都具有較高活性,而陰性對照和空白對照無活性.說明了重組病毒在細胞內(nèi)、家蠶幼蟲和蠶蛹體內(nèi)得到了成功表達,并且具有活性.2、通過對表達產(chǎn)物生物活性測定,細胞內(nèi)表達量為31.98mg/L,蠶血淋巴表達量為210.9mg/L,蠶蛹內(nèi)表達量為37.56mg/
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