Nrf2-ARE信號通路在ALS轉(zhuǎn)基因小鼠模型中的研究.pdf

1、河北醫(yī)科大學碩士學位論文Nrf2/ARE信號通路在ALS轉(zhuǎn)基因小鼠模型中的研究姓名：田苗申請學位級別：碩士專業(yè)：神經(jīng)病學指導教師：李春巖;宋學琴20080301中文摘要差異，了解不同時期機體抗氧化能力的變化情況，也為深入研究轉(zhuǎn)基因小鼠中N r f 2 ／A R E 通路提供前期基礎(chǔ)。方法：l 、轉(zhuǎn)基因鼠的繁殖所有動物均飼養(yǎng)在恒溫( 2 5 ．2 7 。C ) 、恒濕和無菌條件的( S p e c i f i c p a t h o g

2、e n f r e e ，S P F ) 環(huán)境中，喂以滅菌的S P F 級顆粒型鼠類飼料。為維持B 6 S J L ．T g N ( S O D l G 9 3 A ) lG u r 轉(zhuǎn)基因小鼠突變基因穩(wěn)定下傳，將B 6 S J L S O D l G 9 3 A ／+ 半合子雄鼠與B 6 S J L F l ／J 半合子雌鼠交配繁殖．子代鼠經(jīng)基因鑒定確定是否帶有人突變的基因2 、實驗分組研究對象共分為三個時期：癥狀前期( 8 0 天)

3、 、癥狀早期( 1 2 0 天) 、終末期。每個時期組除了選擇S O D l G 9 3 A 小鼠及同窩野生型小鼠外，還選取一組同齡h S O D l 小鼠作對照，為排除小鼠脊髓中人超氧化物岐化酶表達增多對實驗結(jié)果的干擾。3 、N r f - 2 蛋白水平的測定提取脊髓組織的漿蛋白，用S y n e r g y ．H T 多功能酶標儀測量O D 數(shù)值，可檢測樣本蛋白濃度，計算1 0 0 蛋白上樣量。走S D S —P A G E 電泳，

4、1 0 0 V 4 度轉(zhuǎn)膜2 小時、5 ％脫脂奶粉封閉l 小時；一抗孵育，4 0 C ，過夜；T P B S 震蕩漂沈5 m i n ×5次；熒光二抗孵育，室溫，2 h ；T P B S 震蕩漂洗5 m i n ×5 次；O d y s s e y I n f r a r e dI m a g i n g S y s t e m 檢測分析。4 、H O ．1 、N Q 0 1 基因表達水平的測定取脊髓組織6 m g