人汗腺發(fā)生與修復(fù)過(guò)程中基因表達(dá)特征的系列研究.pdf

1、目的：1.研究皮膚及汗腺附屬器官在胚胎不同發(fā)育階段的基因表達(dá)特征，探討汗腺發(fā)育在分子基因水平上的調(diào)控機(jī)制；2.研究汗腺細(xì)胞(SGCs)與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)共培養(yǎng)和MSCs向SGCs誘導(dǎo)培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞表型和基因表達(dá)的變化規(guī)律，探討干細(xì)胞的可塑性在皮膚創(chuàng)面修復(fù)和汗腺組織再生方面的治療可行性。 方法：1.采用HE方法檢測(cè)不同發(fā)育階段人胎兒皮膚組織的生理結(jié)構(gòu)和特征，其次采用免疫組化、RT-PCR和基因芯片篩選等方法全面分析人類

2、胎兒皮膚及汗腺附屬器生理發(fā)育過(guò)程中的基因表達(dá)規(guī)律。2.體外分離培養(yǎng)成人MSCs和SGCs；將達(dá)70％融合的SGCs熱休克損傷后與(1-2)×105MSCs共培養(yǎng)；觀測(cè)細(xì)胞表型變化并采用免疫細(xì)胞化學(xué)、RT-PCR和Westernblotting等方法檢測(cè)融合細(xì)胞相比較于SGCs、骨髓MSCs及成纖維細(xì)胞的基因及蛋白表達(dá)特征。3.通過(guò)設(shè)立對(duì)照組、汗腺組織勻漿組和不同濃度的EGF組，比較在不同的誘導(dǎo)培養(yǎng)介質(zhì)下骨髓MSCs向SGCs橫向分化的潛

3、能，并采用流式細(xì)胞術(shù)和Westernblotting等分子檢測(cè)方法加以鑒定。 結(jié)果：1.不同發(fā)育階段胎兒皮膚組織結(jié)構(gòu)的變化：光鏡下可見不同發(fā)育階段的胎兒皮膚具有典型的組織學(xué)結(jié)構(gòu)。在E12周，表皮僅由1-2層細(xì)胞組成，表皮嵴較明顯，出現(xiàn)局灶增殖相間分布細(xì)胞團(tuán)；E13-14周皮膚表皮細(xì)胞層數(shù)增多，排列無(wú)極性，偶見汗腺原基；E16周后周皮細(xì)胞開始脫落，表皮和真皮均增厚，原基部汗腺細(xì)胞呈索狀向真皮深層生長(zhǎng)；在E20周可見管狀汗腺結(jié)構(gòu)；E

4、23-24周，表皮細(xì)胞4-5層，規(guī)律排列，汗腺結(jié)構(gòu)初步形成；E25-32周，汗腺結(jié)構(gòu)和數(shù)量穩(wěn)定。2.基因芯片篩選、免疫組化和RT-PCR結(jié)果發(fā)現(xiàn)胎兒皮膚及汗腺的形成過(guò)程是不同基因如EGF、FGF10等在細(xì)胞向空間分化時(shí)優(yōu)勢(shì)表達(dá)的過(guò)程。3.汗腺的微分離技術(shù)不僅有助于其生理學(xué)的研究，還有助于汗腺細(xì)胞功能學(xué)方面的研究。4.SGCs與骨髓MSCs共培養(yǎng)后，與自發(fā)融合相比產(chǎn)生了更多的融合細(xì)胞，并在細(xì)胞表型上出現(xiàn)扁平狀上皮樣改變和在分子基因水平上出

5、現(xiàn)SGCs所具有的特異標(biāo)記。5.骨髓MSCs在用不同的汗腺培養(yǎng)介質(zhì)誘導(dǎo)培養(yǎng)后出現(xiàn)跨胚層橫向分化的潛能，表達(dá)自身沒(méi)有而只在SGCs中表達(dá)的分子標(biāo)記。 結(jié)論：1.皮膚及汗腺附屬器的形成嚴(yán)格遵循發(fā)育規(guī)律，基因表達(dá)貫穿其發(fā)育全程，基因芯片等技術(shù)能夠檢測(cè)胎兒皮膚及汗腺附屬器發(fā)育過(guò)程中基因表達(dá)信息。2.骨髓MSCs具有在細(xì)胞融合后向汗腺上皮轉(zhuǎn)變或?qū)ζ湔T導(dǎo)培養(yǎng)后向SGCs橫向分化的潛能和特性，對(duì)開辟和實(shí)現(xiàn)皮膚創(chuàng)面修復(fù)和汗腺組織再生提供新的臨床