臍血造血干細胞歸巢缺陷的修復—巖藻糖基化轉移酶Ⅶ與巖藻糖基化轉移酶Ⅵ的比較研究.pdf

1、目的:比較FTⅦ、FTⅥ介導的體外巖藻糖基化修復臍血造血干細胞表面選擇素配體功能缺陷的能力;比較FTⅦ、FTⅥ提高臍血造血干細胞歸巢植入能力的作用;研究FTⅦ對植入的臍血造血干細胞自我更新及造血重建能力的影響。
　　方法:收集健康足月產(chǎn)婦的新鮮臍血,利用免疫磁珠分離純化出臍血CD34+HSC,分別用FTⅥ、FTⅦ對臍血CD34+HSC進行體外巖藻糖基化處理,采用流式細胞儀檢測處理后的CD34+HSC表面PSGL-1功能基團sLex

2、的表達水平,并比較兩種酶處理后CD34+HSC與P、E-選擇素的結合能力。利用平行板流動小室技術模擬生理狀態(tài)下的血流,比較流動狀態(tài)下經(jīng)不同酶處理的CD34+HSC在P、E-選擇素表面緩慢滾動、粘附的能力。設立實驗分組(空白對照組、陰性對照組、FTⅥ巖藻糖基化組、FTⅦ巖藻糖基化組、FTⅥ/FTⅦ聯(lián)合巖藻糖基化組),對新鮮分離純化的臍血CD34+HSC分別進行不同酶介導的巖藻糖基化處理,建立NSG小鼠移植模型,按分組分別對實驗小鼠進行人C

3、BT,用流式細胞儀監(jiān)測移植后小鼠外周血中人CD45+細胞的表達水平直至移植后10周,比較臍血造血干細胞的植入率及植入速率。移植第10周處死小鼠,采集外周血及骨髓檢測人各系造血細胞標記物的表達水平,比較臍血造血干細胞植入后的自我更新及造血重建能力。
　　結果:FTⅥ和FTⅦ介導的巖藻糖基化均能提高臍血CD34+HSC表面sLex的表達水平并使其達到飽和。FTⅥ、FTⅦ巖藻糖基化處理后臍血CD34+HSC與P-、E-選擇素的結合能力均

4、明顯增強,其中FTⅦ處理后的HSPCs與P-選擇素的結合能力比FTVI強。FTⅦ巖藻糖基化的臍血CD34+細胞在流動狀態(tài)下與P、E-選擇素結合能力比FTⅥ強。FTⅥ/FTⅦ聯(lián)合處理的臍血CD34+細胞與P、E-選擇素的結合明顯高于FTⅥ或FTⅦ單獨處理組。人臍血CD34+HSC移植后第4、6周FTⅦ處理組小鼠外周血人CD45+細胞百分比明顯高于FTⅥ處理組及陰性對照組;FTⅥ/FTⅦ聯(lián)合處理組亦比單獨FTⅦ、FTⅥ處理組高。移植后第10

5、周,FTⅦ巖藻糖基化處理組移植小鼠骨髓中的CD34+細胞明顯高于陰性對照組;FTⅦ處理組移植小鼠的骨髓及外周血中能檢測出分化成熟的各系標記物陽性細胞,且與陰性對照組相比標記物陽性細胞的百分比并不減少;FTⅦ處理組的小鼠骨髓中CD3、CD33的表達水平顯著高于FTⅥ組。
　　結論:FTⅦ相比FTⅥ更能促進臍血HSPC的早期植入,提高植入速率。FTⅦ介導的巖藻糖基化處理并不影響造血干細胞的自我更新,也不減弱造血干細胞造血重建的能力。F