Galectin-8蛋白對組織工程心臟瓣膜種子細胞粘附性影響的研究.pdf

1、目的:
　　檢測 Gal-8蛋白在不同狀態(tài)下對種子細胞粘附性能的影響,找到一種新的方法來提高組織工程種子細胞在瓣膜支架上的粘附能力。
　　方法:
　　取第4代人臍靜脈內(nèi)皮細胞并將其分為四組:I組為重組質(zhì)粒-Gal-8轉(zhuǎn)染組;II組為空質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染組;III組為無處理陰性對照組;IV組為Gal-8蛋白預(yù)鋪固定組。I組將Gal-8基因與質(zhì)粒載體重組后轉(zhuǎn)染到內(nèi)皮細胞中并進行蛋白表達和基因的鑒定。II組將前一組相同空載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)

2、染入內(nèi)皮細胞并進行蛋白和基因的鑒定,作為對照。III組細胞不做轉(zhuǎn)染處理,只做對照。IV組細胞亦不做轉(zhuǎn)染處理,其余處理見以下步驟。
　　將上述四組細胞鋪于96孔板并設(shè)置副孔,其中IV組預(yù)先將Gal-8蛋白鋪設(shè)于待種植培養(yǎng)板,待細胞種植后30、60、90min分別于200倍顯微鏡下每個觀察孔取10個視野檢測其粘附情況并進行統(tǒng)計比較。
　　將以上四組細胞分別種植于已預(yù)先脫去細胞的瓣膜支架材料上,其中IV組預(yù)先將Gal-8蛋白鋪設(shè)于

3、待種植瓣膜支架材料,觀察其1周后各組的細胞生長情況并作比較。
　　結(jié)果:
　　轉(zhuǎn)染后經(jīng)Western和RT-PCR方法分別在蛋白和基因水平鑒定Gal-8,最終發(fā)現(xiàn) Gal-8蛋白和基因大量增加,與陰性對照組相比,結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　細胞種植培養(yǎng)板上30、60、90min后,I組(48.50±7.86,67.90±1.67,84.90±4.25個細胞/視野)相同時間內(nèi)細胞粘附數(shù)量明顯低于II組(79

4、.10±6.28,90.10±5.78,118.40±8.62個細胞/視野)、III組(76.90±6.52,88.40±7.50,117.60±6.67個細胞/視野)和 IV組(209.60±16.91,230.10±17.52,272.30±12.40個細胞/視野),結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),II組相同時間細胞粘附數(shù)量與III組接近,結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),IV組相同時間細胞粘附數(shù)量較I、II、III組更高,結(jié)果