有腎臟系膜細胞內(nèi)血管緊張素Ⅱ刺激下mRNA穩(wěn)定因子HuR蛋白對細胞周期蛋白cyclinD1的轉錄后表達的調(diào)節(jié).pdf

1、研究目的:
　　 人腎臟系膜細胞形態(tài)功能異常是慢性腎臟疾病的重要病理生理變化之一，而血管緊張素Ⅱ在慢性腎臟疾病病變腎臟中均有較高表達，可刺激系膜細胞增生以及細胞內(nèi)多種蛋白的合成增加，從而引起系膜細胞形態(tài)及功能的改變，所以AngⅡ在慢性腎臟疾病的發(fā)生發(fā)展過程中有重要的促進作用。細胞周期蛋白cyclinD1蛋白高表達在促細胞增殖方面有重要作用，所以cyclinD1蛋白作為系膜細胞增殖的效應蛋白。mRNA穩(wěn)定因子HuR蛋白是mRNA結

2、合蛋白，可與效應蛋白的轉錄后mRNA結合，增強其mRNA的穩(wěn)定性，增加其蛋白表達，進一步發(fā)揮重要病理生理作用。研究表明，在生理狀態(tài)下，HuR蛋白可與cyclinDl蛋白的轉錄后mRNA結合，增強其mRNA的穩(wěn)定性，增加其蛋白表達。本研究應用AngⅡ刺激模擬慢性腎臟疾病的病理狀態(tài)，觀察HuR蛋白在AngⅡ刺激下cyclinD1蛋白的轉錄后表達的作用。
　　 研究方法:
　　 1.實驗分組:0A組、3A組、6A組、9A組、2

3、4A組是根據(jù)AngⅡ?qū)θ四I臟系膜細胞的刺激時間即0、3、6、9、24h劃分的。
　　 2.0A組與24A組細胞周期由流式細胞儀檢測。
　　 3.各組HuR蛋白的亞細胞定位變化由免疫細胞化學方法檢測。
　　 4.蛋白表達的檢測:Westernblot方法檢測各組全細胞與胞質(zhì)內(nèi)HuR蛋白及全細胞cyclinD1表達水半。
　　 5.RNA水平的檢測:RT-PCR方法檢測各組cyclinD1的RNA水平。

4、>　　 6.干擾RNA方法觀察抑制HuR蛋白表達后AngⅡ刺激下對全細胞cyclinD1表達的保護效應。
　　 結果:
　　 24A組細胞增殖趨勢較(0)A組更明顯（P＜0.05）:HuR蛋白從胞核轉移到胞質(zhì)的亞細胞定位，以3A組變化最顯著;全細胞HuR蛋白表達水平不變，胞質(zhì)內(nèi)HuR蛋白表達增強以3A組最顯著（P＜0.05）;cyclinD1蛋白表達增強以24A組最顯著(P＜0.05)，而RNA水平保持不變(P＞0.0