人腦膠質(zhì)瘤中細(xì)胞周期蛋白D1(CyclinD1)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的表達(dá)和意義.pdf

1、目的:腫瘤的發(fā)生是多因素共同作用的結(jié)果,細(xì)胞周期調(diào)控失常和腫瘤血管生成是其發(fā)生發(fā)展中的兩個(gè)重要方面。細(xì)胞周期蛋白(Cyclins)是調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的關(guān)鍵因子,CyclinD1是細(xì)胞增殖期G1→S重要的調(diào)控因子,當(dāng)細(xì)胞受到外界物質(zhì)刺激后,CyclinD首先表達(dá),其中最主要的是CyclinD1；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)是血管形成過(guò)程中最重要的因子,它直接刺激內(nèi)皮細(xì)胞(ECs)分裂增殖,是高度特異的血管內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂素,最直接參與誘導(dǎo)腫瘤

2、血管生成。本研究主要目的對(duì)膠質(zhì)瘤進(jìn)行細(xì)胞周期蛋白D1(CyclinD1)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)檢測(cè),并分析兩者在腦膠質(zhì)瘤中表達(dá)的相關(guān)性,以探討其在膠質(zhì)瘤中發(fā)生、發(fā)展中的意義,為分析二者與膠質(zhì)瘤病理分級(jí)的相關(guān)性及生物學(xué)意義提供資料。
　　 方法:52例膠質(zhì)瘤手術(shù)標(biāo)本取自山東省濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院病理科2007年1月至2008年10月存檔的手術(shù)標(biāo)本,參照1999年WHO腦腫瘤分類及分級(jí)標(biāo)準(zhǔn),并經(jīng)兩位病理科醫(yī)師鑒定膠質(zhì)瘤的級(jí)別,

3、Ⅰ級(jí)9例,Ⅱ級(jí)16例,Ⅲ級(jí)12例,Ⅳ級(jí)15例,包括星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤31例,少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤9例,室管膜瘤2例,膠質(zhì)母細(xì)胞瘤10例,正常腦組織為腦外傷行內(nèi)減壓術(shù)切除的腦組織。經(jīng)10％福爾馬林固定,石蠟包埋,連續(xù)切片4μm厚,分別用于常規(guī)HE染色和CyclinD1、VEGF免疫組織化學(xué)染色。采用SP法,石蠟切片常規(guī)脫蠟至水,3％H2O2室溫10min,滴加復(fù)合消化液5min,蒸餾水沈3次,根據(jù)兩種抗體的要求,對(duì)組織進(jìn)行相應(yīng)的抗原修復(fù),每張切片滴

4、加50μl第一抗體,室溫下孵育60分鐘,生物素標(biāo)記的二抗20℃,40 min,加入SP復(fù)合物20℃,40 min,DAB顯色,鏡下控制反應(yīng)時(shí)間,蘇木素輕度復(fù)染,脫水,透明,中性樹(shù)膠封片,以PBS代替一抗作空白對(duì)照,正常腦組織作對(duì)照。CyclinD1蛋白定位于細(xì)胞核,以細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為準(zhǔn)；VEGF蛋白定位于細(xì)胞質(zhì),陽(yáng)性結(jié)果以細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性。在不同位置選取10個(gè)高倍視野,每個(gè)視野100個(gè)細(xì)胞中陽(yáng)性染色細(xì)胞個(gè)數(shù),計(jì)算陽(yáng)性百分

5、率取平均值。分為4級(jí):陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<5％為(-),5％～25％為(+),25％～50％為(++),>50％為(+++。用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS13.0處理,根據(jù)數(shù)據(jù)類型,分別行x2檢驗(yàn)、秩和檢驗(yàn)或Spearman等級(jí)相關(guān)性分析,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　 結(jié)果:1.腦組織與膠質(zhì)瘤組織中CyclinD1的表達(dá):52例膠質(zhì)瘤組織中有37例存在CyclinD1的陽(yáng)性表達(dá),10例腦組織中有1例CyclinD1陽(yáng)性表達(dá),CyclinD1呈典型

6、胞核表達(dá),為棕黃色顆粒狀,核膜染色明顯,有時(shí)因胞內(nèi)染色質(zhì)淡染和核膜深度著色而使整個(gè)陽(yáng)性核看似空泡狀。與正常腦組織相比,膠質(zhì)瘤組織中存在CyclinD1的過(guò)度表達(dá)現(xiàn)象,兩者有顯著差異(P<0.01)(表1)。2.不同級(jí)別的膠質(zhì)瘤組織中CyclinD1的表達(dá):不同級(jí)別的膠質(zhì)瘤中CyclinD1的表達(dá)不同,惡性程度越高,其表達(dá)越明顯(表2)。Spearman等級(jí)相關(guān)性分析表明隨著膠質(zhì)瘤惡性程度的增高CyclinD1表達(dá)增強(qiáng)(P<0.05)3.

7、腦組織與膠質(zhì)瘤組織中VEGF的表達(dá):52例膠質(zhì)瘤組織中有41例存在VEGF的陽(yáng)性表達(dá),10例正常腦組織中VEGF無(wú)表達(dá),VEGF陽(yáng)性表達(dá)物質(zhì)主要定位于細(xì)胞漿內(nèi),呈棕褐色顆粒狀。膠質(zhì)瘤組織中存在VEGF的過(guò)度表達(dá)現(xiàn)象,與正常腦組織相比,有顯著差異(表3)4.不同級(jí)別的膠質(zhì)瘤組織中VEGF的表達(dá):不同級(jí)別的膠質(zhì)瘤中VEGF的表達(dá)不同,惡性程度越高,其表達(dá)越明顯。Spearman等級(jí)相關(guān)性分析表明隨著膠質(zhì)瘤惡性程度的增高VEGF表達(dá)增強(qiáng)(P<

8、0.05)(表4)。5.VEGF與CyclinD1表達(dá)的相關(guān)性:VEGF蛋白陽(yáng)性表達(dá)的41例膠質(zhì)瘤中有25例同時(shí)表達(dá)CyclinD1蛋白,統(tǒng)計(jì)學(xué)顯示有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(x2=7.58,P<0.05)(表5)。
　　 結(jié)論:
　　 1、CyclinD1和VEGF在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)量高于正常腦組織,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2、CyclinD1和VEGF的表達(dá)隨著膠質(zhì)瘤惡性程度的增加而增強(qiáng)。
　　 3、二者在膠質(zhì)瘤組