血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子mRNA在原發(fā)性肺癌中的表達(dá)和意義.pdf_第1頁(yè)
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1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子mRNA在原發(fā)性肺癌中的表達(dá)和意義姓名：楊榮利申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：胸外科學(xué)指導(dǎo)教師：陳東義2000050114例，平均年齡5744111(范圍34～74歲)；鱗癌13例，小細(xì)胞肺癌6例，腺癌10例，大細(xì)胞肺癌3例，混合癌2例；TNM分期I期13例，II期12例，III期9例。實(shí)驗(yàn)方法1總RNA提?。焊髑腥〖s300毫克肺癌組織及正常肺組織，用TRIzol試劑法提取總RNA，于分光光度計(jì)下測(cè)定RN

2、A濃度，調(diào)整其終濃度為1pg／肛l，然后置于一80℃深低溫冰箱中凍存。2反轉(zhuǎn)錄及PCR擴(kuò)增：適量總RNA加入OligodT引物，于70℃孵育lO分鐘，再加入buffer、dNTP、RNA酶抑制劑及AMV，于37℃孵育50分鐘。在此基礎(chǔ)之上進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR反應(yīng)體系如下：取RT產(chǎn)物5皿，依次加入緩沖液、VEGF上、下游引物、TaqE、ddH20，然后送PCR儀上擴(kuò)增。PCR反應(yīng)條件為：95℃變性2分鐘，按94“C1分鐘，55℃1分鐘，

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